Bonjour à tous!
Je suis étudiant en thèse. Je suis actuellement en train de mettre au point un Northern blot afin de valider la spécificité d'une sonde pour mon gène d'intérêt, sonde que j'utiliserai ensuite pour étudier la néobiosynthèse des ARNm de ce gène par transcription run-off. Problème : je n'obtiens qu'un ladder d'ARN marqué. J'essaie donc de savoir si ce problème de spécificité de ma sonde est du à un problème de conditions d'hybridation ou à la sonde elle-même. Je cherche donc une sonde pour un gène de ménage dont la spécificité est avérée. J'aimerai une sonde GAPDH car, une fois ma technique au point, j'aurai besoin de ce gène comme contrôle de charge.
Après de nombreuses recherches dans la littérature scientifique, je n'arrive pas à trouver une séquence de sonde publiée. J'ai de superbes images de Northern GAPDH, mais bien sûr, la séquence n'est jamais donnée dans le matériel et méthodes...
Quelqu'un aurait-il dans ses tiroirs une pub avec une séquence? Parrallèlement, je vais continuer à voir les fournisseurs du commerce, mais c'est pas évident non plus (Sigma avait un ADNc contrôle mais qu'il ne produise plus...)
Merci par avance! Bonne soirée!
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