Bonjour,
Je dois produire une protéine grande environ 160 kDa avec un système de production transcription / traduction provenant de mais, homme, lapin et bactérie. Me protéine est une protéine de levure.Voilà ce que je pensais faire :
1/ construire deux vecteurs (la protéine a un compagnon accroché), avec des Tag GST (dans la littérature ils préfèrent ce type tag)
2/ utiliser un kit (à priori à base de réticulocyte de lapin, là aussi les gens qui bossent sur la levure utilisent plutôt ce genre de chose
3/ purifier sur colonne avec le Prescission protease
4/ contrôler en western
5/ faire les expériences in vitro que j'ai l'intention de faire
La protéine en question est un polymérase, on veut lui fournir différents substrats.
Ma question est la suivante : Quelqu'un a-t-il déjà utilisé ce genre de kit pour un application similaire (grande protéine - GST - et levure) Si oui lequel avez vous utilisé ?
Merci de vos réponse.
Xerli.
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