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L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure




  1. #1
    neferesis

    Question L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

    Bonsoir, je suis en master pro et je recherche le rôle de certain tampons présents lors de l'extraction d'ADN génomque et lors de la transformation de S.cerevisiae
    Merci d'avance

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    Djelaba

    Re : L'extraction d4ADN génomique et transformation de levure

    Euh bah quel tampon ?
    Perso je connais l'extraction avec du phénol, dans un tampon neutre :
    - broyage des cellules.
    - Centrifugation : Acides nucléiques dans la phase aqueuse (au dessus) et protéines dans la phase phénolique

    Je connais également l'extraction/purif d'ADN grâce à l'isothiocyanate de guanidinium puis adsorption sur silice.
    - Broyage avec l'isothiocyanate de guanidinium (puissant dénaturant de protéines) passage sur une couche de silice. On force l'ADN (chargé - ) à se fixer sur la silice grace une forte force ionique ( forte concentration na+ )
    Les arn et les protéines dénaturées lysées (on fait agir une protéase pour éviter que les nucléases ne détériorent ton ADN) sont récupérés dans une première fraction, on élue ensuite l'adn en diminuant la force ionique.

  4. #3
    Yoyo

    Re : L'extraction d4ADN génomique et transformation de levure

    Citation Envoyé par neferesis
    Bonsoir, je suis en master pro et je recherche le rôle de certain tampons présents lors de l'extraction d'ADN génomque et lors de la transformation de S.cerevisiae
    Merci d'avance
    Le mieux serait en effet de nous indiquer quel(s) tampon(s) car y'a a peu pres autant de methodes que de labo
    Yoyo


  5. #4
    neferesis

    Re : L'extraction d4ADN génomique et transformation de levure

    Alors j'ai du PEG (complexant des molécules H2O je crois) Mais je vois pas trop à quoi ça sert dans la transformation de cellules, de l'acétate de lithium (pour créer des pores?) et de l'ADN de sperle de Hrang dénaturé (là je vois pas...) tout ça c'est pour le protocole de trasnfo. Sinon dans un tampon général pour l'extraction d'ADN, j'ai du TritonX-100 je sais que dans certain cas d'immunocytochimie c'est pour éviter que les molécules d'eau s'adsorbent sur une surface en verre mais là...

  6. #5
    Yoyo

    Re : L'extraction d4ADN génomique et transformation de levure

    Salut

    Le PEG permet de destabiliser les lipides a la surface des cellules, il est aussi souvent utiliser pour faire fusionner les cellules.
    Le LiAc est en effet utilisé pour perméabiliser la membrane des levures
    L'ADN de sperme de hareng (ou saumon) est un "ADN carrier" c'est a dire qu'il va servir d'entraineur a ton propre ADN, servant principalement a le protéger des nucleases.
    Pour le Triton X-100 c'est un detergeant non ionique.

    YOyo

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    neferesis

    Smile Re : L'extraction d'ADN génomique et transformation de levure

    Merci beaucoup et Joyeuses Fêtes de fin d'année

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