miRNA

[invite5806538a]

Bonjour!

J'ai un soucis avec un QCM:
Si vous vouliez détecter exclusivement les miRNA matures, quelle(s) méthode(s) utiliseriez vous?
-Northern blot
-hybridation in situ
-RT-PCR avec amorces dans le pré-miRNA

Pour moi, aucune méthode ne fonctionne: le Northern blot n'est pas assez sensible, et les 2 autres ne permettent pas de différencier les matures des pré-miRNA...

En meme temps, une autre question: combien de proteines sont codées par le génome humain?
J'ai 2 chiffres: 90.000 et 2 millions, mais je ne comprends pas bien à quoi ils correspondent...

Merci d'avance! =)
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[invite5806538a]

Personne?

J'ai peut-etre trouvé une explication, mais je ne suis pas sure:
On fait une reverse transcription avec des amorces contenus dans le pre-microRNA et dans le microRNA mature. Après l'amplification du cDNA qu'on a obtenu, on voit avec un cDNA micro array si on trouve des séquences "supplémentaires" qui n'appartiennent qu'au pre-microRNA. Si on n'en trouve pas, on peut conclure qu'on a exclusivement détecté le microRNA mature.
J'ai trouvé ça la http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2663046/

Mais ça me semble bizarre comme méthode, ça veut dire qu'on fait une RT-PCR mais sans savoir ce qu'on amplifie...
Du coup, si vous avez un avis, je suis preneuse =)