PM de ma protéine trop grand

[invited65854e1]

Bonjour,
Je fais mon Western sur phospho-GSK3-beta et d'apres la fiche produit et la littérature cette prot devrait apparaitre à 47 kDa. Or la bande apparait visuellement au dessus de mon marqueur à 49 kDa, et après calcul la prot de l'unique bande possède un PM de 55 kDa.

Je suis quasi sûre que c'est bien ma GSK, mais pourrait-il y avoir des phénomènes comme la glycosylation par exemple, qui peuvent rajouter des groupements et alourdir la phospho-GSK3-beta ? Car ça fait une différence de 8 kDa quand même c'est énorme !

Merci bien pour votre aide
Cordialement
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[Flyingbike]

Que ce soit bien la GSK-3ß reste à vérifier, mais sachez qu'en WB on parle de PM apparent. En effet la distance de migration dépend de plusieurs facteurs qui peuvent varier entre les extraits protéiques expérimentaux et le marqueur commercial : quantité de protéines, concentration en sels, etc. L'idéal pour être sur est de disposer d'une protéine recombinante, d'extraits ou la protéine est inhibée (siRNA, animaux KO, etc) ou surexprimée.

[invited65854e1]

Que ce soit bien la GSK-3ß reste à vérifier, mais sachez qu'en WB on parle de PM apparent. En effet la distance de migration dépend de plusieurs facteurs qui peuvent varier entre les extraits protéiques expérimentaux et le marqueur commercial : quantité de protéines, concentration en sels, etc. L'idéal pour être sur est de disposer d'une protéine recombinante, d'extraits ou la protéine est inhibée (siRNA, animaux KO, etc) ou surexprimée.

Merci mille fois pour votre réponse !!!

[Flyingbike]

même deux ans après, ca fait toujours plaisir
bon courage

[A voir en vidéo sur Futura]