séparations de protéines

[invitea59d7d60]

Bonjour à tous,
Je suis nouveau sur ce forum alors désolé si j'ai loupé une étape.
Alors voilà j'aurais aimé connaitre toutes les techniques de séparations des protéines en connaissant les avantages et les défauts.
Je sais qu'il y a la chromatographie d'exclusion,la chromatographie échangeuse d'ions, la chromatographie d'exclusion stérique, l'HPLC.
J'aurais voulu savoir qu'elle est la meilleur technique de séparations de protéines, sachant que je me trouve en présence d'un échantillon où les protéines ont un poids moléculaire assez proche.
J'aurais aussi aimé savoir si il est possible de mettre différents gels dans une seule et même colonne de chromatographie d'exclusion où si il faut faire passer les fractions obtenus dans une autre colonne et quels types de gels utiliser? (Sephadex, Biogel, Sépharose, Ultragel, Bioglass. . . )
Merci pour votre aide
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[invitea59d7d60]

UP

[invite2db69bfb]

Bonjour !

Je ne suis qu'étudiant en Licence, mais peut être que ça te servira.
Lors de la séparation de protéine, on m'a toujours dit d'aller du plus grossier et on affine de plus en plus. En plus de ça, connais-tu quelque chose sur ta protéine? Car avant de séparer quoi que ce soit, il faut que tu sois capable de détecter la présence de ta protéine.
Ensuite, je ne pense pas qu'il y a THE chromatographie qui te donnera tout de suite la protéine pure que tu cherches. Souvent la chromatographie échangeuse d'ions est utilisée en premier. Mais si tu connais des substrats ou autres molécules pour lesquelles ta protéine a de l'affinité, tu peux en réaliser une autre.
Suite à quoi, il faudra faire une chaine de chromatographie en testant à chaque fois une caractéristique particulière ! (Affinité pour les ions, poids moléculaire etc...)
(Généralement si au bout de 3-4 Chromatographie tu n'as pas ta protéine pure... tu peux commencer à essayer autre chose ! ^^'

Donc bon, pour répondre à la question initiale, il n'y a pas une chromatographie meilleure que l'autre même si certaines sont moins chères, plus rapides etc... mais ça dépend plus des caractéristiques de ta protéines que tu peux connaître.

Pour les gels, je pense qu'il faut faire des colonnes différentes. ^'^

En espérant t'avoir apporté peut être un petit élément de réponse !
Bonne journée ! (soirée...!)

[invitea59d7d60]

Salut et merci pour ta réponse
Je pense que je n'ai pas été assez claire
On va dire que je n'ai aucune protéine qui m'intéresse en particulier ma problématique est la suivante :
Comment séparer des protéines qui ont des PM quasiment identiques? Pour ce qui est de leurs charges électrique je ne saurais dire car c'est plus un exercice de réflexion sur le PM

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite2db69bfb]

Re !

Ah excuse moi dans ce cas. :/
Tu ne t'intéresses qu'aux poids moléculaires... hum... Parce que si non j'aurais dit Eléctrophorèse 2D avec SDS-Page + Point Isoéléctrique.
De toute façon pour séparer selon les poids moléculaires je partirai plus sur des gels de séparation (éléctrophorèse) que des colonnes de chromatographie. ^^

[invitea59d7d60]

Merci à toi
Je pensais à deux type de séparations :
Chromatographie d'exclusion : une qui permet de faire un première séparation et une seconde plus fine
Mais quel type de gel choisir?
Électrophorèse pour être sûr du résultat que j'ai obtenu en chromatographie
Même problématique : quel type de gel utilisé et à quel %?
L'HPLC serait un bon compromis mais quel colonne utiliser ?

[Flyingbike]

PM proche : à quel point ?
Quel est le but de la séparation ? (détection, purification, etc) ??

[invitea59d7d60]

Salut,
J'ai demandé à mon prof pour avoir plus être plus clair
Sa serait en quelques que sorte une caractérisation de protéines dans un liquide
Pour les PM ; prot A 1560, prot B 15980, prot C 17250, prot D 18600
Merci pour tout

[invitea59d7d60]

Je pensais aussi à une méthode histochimique du genre Immunoélectropohorèse
J'attends vos avis

[invitec0b62935]

Salut,
J'ai demandé à mon prof pour avoir plus être plus clair
Sa serait en quelques que sorte une caractérisation de protéines dans un liquide
Pour les PM ; prot A 1560, prot B 15980, prot C 17250, prot D 18600
Merci pour tout

Si tu cherches seulement à mettre en évidence la présence de ces protéines dans ta solution, le SDS page est la méthode de choix.
Si tu veux ensuite étudier ces protéines notamment sur le plan fonctionnel, tu as besoin d'une méthode non destructive ce qui élimine le SDS-page. A ma connaissance, il n'existe aucune technique non destructive capable de séparer des protéines de poids aussi proches. Il faut purifier sur d'autres paramètres que la masse et la première méthode qui vient à l'esprit est la chromato par échange d'ions.

[invitea59d7d60]

Merci, c'est bien ce qu'il me semblait mais bon je en sais pas si c'est ce qu'il attend!
La méthode de la chromatographie d'exclusion en deux fois ne pourrais pas aller?
Merci en tout de m'aider

[invitea59d7d60]

Bonjour,
Il nous a enfin donné plus d'information en nous donnant les PI de chaque protéines,
La solution et donc toute trouvée : électrophorèse 2D