spectrophotométrie

[invite21d35e82]

voila , j'ai un probléme avec cela.
c'est au niveau de l'étude des protéines , on nous dis que le tryptophane absorbe a 280 nm.
puis ensuite sur mon cours j'ai un shémas de fonctionnement d'un spectrophotométre et on me dis que l absorbance est proportionelle a la concentration de l'échantillon.
je ne vois pas tellement ou on veux en venir.
aprés la lumiére incidente il ya un échantillon ( de je ne sais pas quoi ) , aprés on a les résultat sur l'ordi.
les résultats vont nous dire selon l absorbance quel protéine il y a dans la solution ? la concentration de la solution ?
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[invite070ab2d4]

Le résultat va te donner l'absorbance de ton échantillon à une certaine longueur d'onde. C'est-à-dire la quantité de lumière de cette longueur d'onde qui a été absorbée par l'échantillon.
Donc, si tu sais que ton échantillon est de la protéine pure, et que tu a le "coeficient d'absorption" des protéines à 280nm tu en déduis la concentration de ton échantillon en protéines (enfin, l'ordinateur la calcule pour toi, en l'occurence).
Attention si tu as dans ton échantillon des produits qui absorbent aussi la lumière à 280 nm ta mesure en sera faussée, tu sur-estimera la concentration, car le spectrophotomètre ne différencie pas les produits entre eux, c'est juste une mesure globale.

[invite21d35e82]

merci beaucoup

[invite398475c8]

En général on utilise la méthode de Bradford qui consiste à utiliser le Bleu de Coomassie G250 (se complexe aux protéines et absorbent à 595 nm) qui permet un dosage plus sensible car son coefficient d'extinction molaire est élevé.

[A voir en vidéo sur Futura]