Enzyme de restriction et activité étoile!

[invite1ee7d6fb]

Bonjour tout le monde!

L'activité étoile survient lorsqu'une digestion ne se produit pas dans les conditions optimales de l'enzyme. L'enzyme se met à couper a peu près partout et son site de restriction, souvent, se raccourci et l'enzyme produit plus de fragments que supposé. Ma question est, disons qu'une enzyme produit des extrémités 5' cohésives théoriquement, est-ce qu'elle va continuer de produire des extrémités 5' cohésives même si elle est dans des conditions d'activité étoile?

Merci,
Julien
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[invite1ee7d6fb]

Ça semble être une question sans réponse... je trouve nulle part le moindre indice!

[invitee4e79868]

Idem, impossible de trouver une réponse clair (dans NEB biolabs ou Takara en tout cas).
Sinon, pour s'assurer que tout les morceaux soit à bout franc, il suffit de rajouter une autre enzyme, comme la nucléase S1, par exemple (il y en a d'autre). Cela permet toujours de réaliser un clonage après purification et sélection du fragment désiré.
Sinon, si l'objectif est de n'obtenir que des fragments à bouts cohésifs, c'est une autre paire de manche (pourquoi ne pas essayer une digestion partielle?). Ou un clonage qui permettent d’insérer un site de restriction plus commun?

[invite1ee7d6fb]

Mon professeur semble être 100% certain que le type d'extrémités ne change pas avec l'activité étoile, seule la grandeur des fragments et la grandeur de la queue simple brin des embouts cohésifs...

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

Je ne suis pas sur que l'information se trouve quelque part. Je ne suis pas sur non plus que ce soit si important. La chose a garder en tête c'est que dans des conditions non optimales, l'enzyme perd de sa spécificité de reconnaissance et/ou de coupure.