Bonjour!
Je voulais avoir une petite précision sur les enzymes de restriction. Dans mon exercice j'ai un tableau avec différentes enzymes de restriction et les séquences clivées correspondant a chaque enzyme. Cela veut dire que si j'ai par exemple pour une enzyme X, la sequence clivee : GTAC, cette enzyme va couper avant et après GTAC dans l'ADN?
Merci d'avance!
Bonjour,
Tout dépend de ton enzyme de restriction. Il en existe de toutes sortes, celles qui reconnaissent une séquence et qui coupe 100 nucléotides plus loin, celles qui vont couper à l'intérieur de la séquence de reconnaissance, celles qui vont avoir besoin de 2 séquences de reconnaissances mais n'en couper qu'une, ou même encore ailleurs, etc.
Le cas le plus utilisé en biotech, c'est les enzyme de type II qui vont couper à l'intérieur de la séquence de reconnaissance. C'est en général une séquence d'environ 6 nucléotides et une séquence palindrome, c'est-à-dire que les deux brins, lus dans le même sens (3'->5' par exemple) vont donner la même séquence:
exemple:
3'-GCATGC-5'
5'-CGTACG-3'
La encore il existe 2 types d'enzymes:
-celles qui vont couper en blunt end, càd qu'elles ne vont pas laisser de partie a un seul brin, dans l'exemple précédent elle couperait entre le A et le T et donnerait:
3'-GCA------TGC-5'
5'-CGT------ACG-3'
-celle qui vont couper en cohesive ends et laisser à chaque fragment un morceau d'ADN monocaténaire. de retour à l'exemple, disons que l'enzyme coupe entre le G et le C en position 1 et 2. On marque normalement ça comme ça: 3'-G|CATGC-5'
et ça va donner:
3'-G-------------CATGC-5'
5'-CGTAC-------------G-3'
J'ai peut-être été un peu trop dans le détails, mais voilà comment la plupart des enzymes vont couper...
Cordialement,
Astro
Bonjour,
Je dirais plutôt que l'enzyme de restriction va cliver à l'intérieur de cette séquence et générer ainsi 2 fragments soit à bouts francs soit cohésifs. Elle peut cliver en plein milieu ou après un nucléotide ou trois nucléotides, tout dépend de l'enzyme.
Edit: grillée mais au moins c'est bien mieux illustré que mon message!
d'accord ! je crois que dans mon exercice cette enzyme coupe au milieu , d'où le nom de ''séquence clivée'' !!j'ai compris !! merci!!!
Bonsoir,
Du coup si on nous dit qu'une enzyme coupe la séquence 5'CCCAAA en son milieu, elle coupera aussi une séquence 5'AAACCC (vu qu'elle coupe 3'AAACCC) ou elle différenciera une paire de base AC d'une paire de base CA dans le grand sillon ???
J'ai un petit doute! ^^
Merci d'avance!
