culture cellulaire sans CO2

[invitefe84974f]

salut,
est ce que c'est faisable de faire cultiver les lymphocytes dans le milieu de culture DMEM pendent 72H à 37C° sans CO2 ( car nous n'avons pas les moyens pour acheter un incubateur à CO2).

Merci.
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[invitee4e79868]

Il faut savoir que le CO2 en culture cellulaire sert à tamponner le milieu, donc à empêcher les écart de pH.
Certaines cellules s'en fichent, d'autre ne supporte pas 12h sans CO2.
Pour les lympho, je ne sais pas, mais je ne pense pas (car s'il y a variation de pH => stress sur les cellules => résultats non interprétables)

[invitefe84974f]

Merci pour votre réponse, mais là je vaudrais savoir si il y a un autre
moyen de faire gazifière mes lymphocytes sans passer par l'incubateur à CO2.

Merci.

[invitee4e79868]

Il y a un autre moyen, je viens de m'en rappeler.
En microscopie, pour réaliser des timelapse de longue durée, nous utilisions un bulleur de CO2. En gros, tu prends une bouteille de CO2 avec un disteudeur réglable, une bouteille d'eau distillé dans laquelle tu fais "buller" ton CO2 (avec une entré et sortie par la bouchon) pour humidifer le gaz et éviter l'évaporation de ton milieu, le tout injecté dans une boite non fermé hermétiquement (style une grosse boite de culture) dans laquelle tu puisses mettre tes boites avec tes échantillons. Et bien sur, la grosse boite dans une étuve à 37°C.
Cette méthode est moins écologique que l'incubateur à CO2, car ce dernier est capable de contrôler la quantité de CO2 à injecter pour garder un 5% de concentration, mais pour des expériences courtes comme la tienne, je pense que cela devrait être bon.

Au cas où, un schéma est plus explicatif qu'une tonne d'explications

Après, il ne faudra que calculer la pression de sortie de la bouteille air/5% CO2 (probablement dans les environs de 1 bar) et c'est tout! Il est possible de bricoler tout cela assez rapidement, il ne faut que la bouteille de gaz!

Ah, je viens de penser qu'il faudrait comme même un filtre 0.2µm pour la stérilité de l'air! à placer disons juste avant la chambre à incuber.
Si tu as un moyen (sonde) de mesurer la quantité de CO2, cela serait le nec plus ultra pour toi.

En espérant avoir répondu à tes questions

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb3a6feac]

Bonjour

Vous pouvez remplacer le milieu de culture toutes les 12h avec de fortes concentrations en tampon HEPES, il tamponne plutôt bien le milieu, et peut compenser l'absence de Co2 pendant un certain temps.

Nowell

[invitefe84974f]

je vous remercie beaucoup (biseibutsu,nowell) pour votre aide très précieux.