différence entre western blot et immunoblot

[beam86]

Bonjour à tous,


voila je voudarais savoir si quelqu'un connait la différence entre le western blot et l'immunoblot?

Merci
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[thejohnou]

Un western blot est un cas particulier d'immunoblot. Un immunoblot est une technique avec laquelle tu détectes des molécules immobilisées sur une membrane avec des anticorps. Un western blot est un immunoblot dans lequel tu détectes des protéines séparées par électrophorèse.

[beam86]

ok je vois c'est quoi l'intéret alors de séparer les proteines (westernblot) si on peut les précipiter en solution (immunoblot)?

[biseibutsu]

Yop,

L’intérêt de les séparer est de pouvoir identifier un ou des isoformes. Et permet également de vérifier la taille de sa protéine, lorsque l'on rajoute un marqueur de taille.
L'immuno-blot est aussi appelé Dot-Blot, car on dépose les échantillons sur la membrane sous forme de rond (de la taille d'un puits de plaque 96 puits). Cette technique est plus rapide car elle permet d'économiser le temps de la migration et en partie du transfert (le temps de transfert/fixation d'un dot blot est généralement plus court que celle d'un WB). Enfin, le Dot-Blot permet d'avoir une approche semi-quantitative de ses protéines plus précises que le WB.

[A voir en vidéo sur Futura]

[beam86]

mmmmm ok je vois. on fait le WB par exemple pour séparer la procaspase 3 (forme inactive) et la caspase 3 clivé (forme active) ou encore p53 et p-p53 (p53 phosphorylé)
n'est ce pas!!

[biseibutsu]

Exact!
il est également possible de marquer deux protéines de tailles différentes. Par exemple p53 et la tubuline, qui sert généralement de protéine "rapportrice" (ou l'actine, dans le cas d'une extraction du noyau).
Comme d'hab en science, tu choisiras la technique dont tu as besoin, avec le magnifique rapport information/temps. Mais généralement, c'est le WB qui gagne par rapport au Dot-Blot.

Enfin, je précise également, qu'il est possible de réaliser des Dot-Blot avec des protéines, mais également avec de l'ADN et/ou de l'ARN (il y a juste la membrane qui change!)

[beam86]

ok je vois, à propos des contrôle interne quand est ce qu'on utilise la GAPDH, la tubuline ou l'actine? Ou on peut utilisé celle qu'on veut?

[biseibutsu]

Classiquement, le contrôle interne est la tubiline. Enfin, dans le cas où tu lyse toute la cellule.
Dans le cas où tu extrais les noyaux, il n'y a plus de tubuline, on passe donc à l'actine. Elle est également (de temps en temps) utilisé lorsque l'on détecte des protéines nucléaires uniquement.
Pour la GAPDH, je sèche. Je ne vois pas du tout . Tout ce que je sais, c'est que je ne l'ai pas utilisé lors de ces 4 dernières années.

[beam86]

ok merci qd même

[carlitooo]

Bonjour,

j aimerai savoir ce que vous pensez sur le fait que des test de confirmation de séropositivité se font avec le western Blot,

or qu il se dit que le VIH n a finalement jamais pu etre purifié..


ce qui classerai ce test par rapport au VIH, non spécifique..

merci

[biseibutsu]

Hahaha!

or qu il se dit que le VIH n a finalement jamais pu etre purifié..

La bonne blague
Cependant, ne dites pas cela à mes collègues qui travaillent en labo P3 sur le VIH, ils risquent de mal le prendre
Il n'est pas bien difficile de purifier un virus une fois que l'on sait l'isoler et le cultiver (chose que l'on fait depuis longtemps avec le VIH). Quand à la technique du WB/immunoblot, en plus de 30 ans, elle a toujours fait ses preuves. Et il n'y a pas de raison que cela change uniquement pour le VIH.
On a des sujets long comme le bras sur les tests VIH qui contiennent toute les informations nécessaires (avec les liens qui vont avec généralement).
Entre autre, ici => http://forums.futura-sciences.com/ms...-test-vih.html