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températures et PCR



  1. #1
    maths33

    températures et PCR


    ------

    Bonjour,

    J'ai des questions concernant la PCR.
    Je n'arrive pas à trouver quelque chose de clair sur internet.
    Pourquoi le Tm dépend de la composition des amorces ?
    Plus il y a de GC et plus la température d'hybridation est élevée mais pourquoi ? Il faut une forte température pour créer les liaisons ?
    Est ce que le Tm et la température d'hybridation c'est la meme chose ??

    Merci d'avance.

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    yassirlek

    Re : températures et PCR

    Bonsoir,
    Une séquence riche en GC est difficile à dénaturer puisque la paire GC est liée par 3 liaisons d’hydrogène!
    Pour la dénaturer ! il faut augmenter la température de dénaturation.
    la Tm dépend de la composition en bases de la séquences ADN considérée, selon cette formule :
    Tm = 2 x (A+T) + 4 x (G+C)
    --
    la Température d’hybridation = Tm – 5°C.
    Si la T° d'hyvridation( Ta) est trop basse, on va avoir des Hybridations non spécifiques

  4. #3
    Loupsio

    Re : températures et PCR

    Bonjour,
    Pourquoi le Tm dépend de la composition des amorces ?
    car il se calcule de la façon suivante:
    Tm= 2(A+T) + 4(G+C)

    Plus il y a de GC et plus la température d'hybridation est élevée mais pourquoi ? Il faut une forte température pour créer les liaisons ?
    non mais il faut une forte température pour les dénaturer (séparer un G d'un C demande une température supérieur a la séparation d'un A et d'un T)
    donc ca détermine la stabilité de tes liaisons

    Edit: croisement avec yassirlek ^^

  5. #4
    maths33

    Re : températures et PCR

    Ok merci.
    La formule je l'a connais justement ce n'est pas un hasard je voudrais la comprendre.
    Je comprends bien qu'il faut une forte température pour dénaturer les GC mais du coup il faudrait une température d'hybridation faible non ? Donc je me suis trompée...

    La température d'hybridation c'est celle qui permet que les amorces se fixent à la matrice si je comprends bien et le Tm c'est la température a laquelle il y a 50% de simple brin mais je n'arrive pas a faire le lien avec les amorces parce que ça c'est la dénaturation non ?

  6. #5
    mmm91

    Re : températures et PCR

    Citation Envoyé par maths33 Voir le message

    La température d'hybridation c'est celle qui permet que les amorces se fixent à la matrice si je comprends bien et le Tm c'est la température a laquelle il y a 50% de simple brin mais je n'arrive pas a faire le lien avec les amorces parce que ça c'est la dénaturation non ?
    Salut,

    Pour que tes amorces puissent s'hybrider à la matrice d'ADN, il faut que celle-ci sois dénaturée pour permettre l'accessibilité des amorces. Ainsi à Tm-5°C on considère que l'hybridation peut se faire correctement. Et oui, le Tm est la température à laquelle tu as 50% de ton ADN sous forme simple brin (et donc 50% en double brin).

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    maths33

    Re : températures et PCR

    Ok c'est clair par contre je ne comprends toujours pas pourquoi Tm = 2x(A+T)+4x(G+C). Parce que plus il y a de GC plus c'est dur à casser et donc il faut augmenter la température pour avoir 50% de simple brin ??

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  10. #7
    Loupsio

    Re : températures et PCR

    Si la température est trop haute tes amorces ne pourront pas se fixer, la température brisera les liaisons hydrogènes présentes entre ton amorce et ton simple brin

  11. #8
    maths33

    Re : températures et PCR

    Pourquoi une PCR touchdown permettrait alors d'augmenter la spécificité d'hybridation ?

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