PCR conventionnel et PCR en temps réel

[invite2bdd5564]

je veux savoir qu'elle est la différence entre PCR conventionnel et PCR en temps réel.
merci
Sahar
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[Jean-Luc P]

DAns la PCR en temps réel on ajoute un rapporteur fluorescent qui permet d suivre l'évolution du bins à chaque itération. Il y a donc lecture en continu, alors que pour la PCR classique, on n'a le résultat qu'à la fin.

[invite75e918c6]

Voila, quasi tout est dit, on peux faire de la cinétique avec une PCR en temps réelle avec une notion de temps tandis que l'autre, faut attendre la fin et on n'a pas de suivi de l'évolution des cycles

[Flyingbike]

j'ajouterai que la PCR en temps réel est nécessaire pour quantifier la matrice d'ADN. En effet on ne peut déterminer la quantité initiale que pendant la phase exponentielle de l'amplification, on doit pour cela suivre l'amplification grâce a l'incorporation d'un intercalant.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invited01f27ec]

slt
On peut mentionner également qu'il existe plusieurs variantes de real time PCR, celle qui utilise les agents intercalants tels que le BET et la cybrGreen, et d'autres qui utilisent des sondes fluorogeniques tel que les sondes TaqMan et les amorces scorpion, dans les deux cas l’évolution de l’amplification est visualisée en temps réel dans l’écran du lightcycler.
bon courage.

[invite853321bf]

C'est SybrGreen I et un thermocycleur en temps réel, on n'est pas obligé d'être chez Roche pour en faire
Mais le BET n'est plus utilisé depuis la mise au point de la technique à cause de son haut pouvoir mutagène, on lui préfère le Sybr Green I qui l'est moins.
On peut citer trois autres avantages :
- La technique est beaucoup plus sensible (à peu près 1000 fois)
- on peut donc produire des amplicons plus courts (une longueur de 100 pb n'est pas anormale)
- le temps de la PCR sera donc plus court et en plus on a le résultat direct à la fin