Bonsoir,
Petite question : dans mon cours sur la PCR, j'ai noté qu'on utilisait du Mg2+ pour neutraliser les charges des phosphates de l'ADN. On se retrouve donc avec des matrices ADN pour PCR neutres. Mais lorsqu'on effectue la migration électrophorétique sur gel d'agarose, comment l'ADN va-t-il migrer s'il n'est pas chargé ... ?
Merci d'avance !
Bonjour
A ma connaissance, le Magnesium est là en tant que cofacteur de la Taq polymérase, pas pour neutraliser des charges (bien que mis en solution il va surement se fixer aussi sur des phosphates, ce n'est pas son rôle dans la PCR)
Dernière modification par Loupsio ; 11/05/2013 à 13h51.
Re-bonjour,
Merci de la correction Loupsio. Tant qu'on est dans le sujet, j'ai sur mon polycopié indiqué que le KCl ajouté dans le milieu de réaction de PCR était là pour activer l'ADN polymérase... Est-ce vrai ou est-ce encore une erreur de la prof ?
Du KCl ???
Sinon normalement dans le tampon de gel et tampon de migration (TAE OU TBE) il y a de l'EDTA qui chelate le MgCl2.
Bonjour,
Oui, voici la preuve en image, une des diapos du poly qui indique l'utilisation de KCl dans le tampon de réaction :
