radioactivité marquage des nucleotides HELPP

[invitef1648d69]

Bonsoir, dans ma matière Bio Mol un exo reviens toujours dans nos annales, sauf qu'on a pas les corrigés, du coup impossible de comprendre
voici la question et l'exo:
Un fragment va etre utilisé pour preparer une sonde pour un Northern,
Vous disposez des deux fragments suivants:
A: 5' AATTGAGCTTGACGGAGCAGC 3'
3' CTCGAACTGCCTCGTCGTTAA 5'

B: 5' CTTGACGGAGCAGAGCT 3'
3' TCGAGAACTGCCTCGTC 5'
Pour marquer radioactivement ces fragments vous utilisez une ADN polymerase et un mélange de trois DNTP non radioactifs auquel vous ajoutez un quatrieme nucléotide radioactif. Vous disposez des nucleotides suivants :
- alpha 32P-dCTP
-alpha 32P-dATP
-gamma 32P-dATP
-alpha 32P-TTP

Enfin la question: Votre sonde est radioactive seulement quand vous utilisez le fragment A et comme nucleotide radioactif le alpha 32P-dATP, pourquoi?

Cette reponse est un vrai mystere on ne l'a meme pas aborder en cours, s'il vous plais aidez moiiii !!!!!!!
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[invitef1648d69]

personne ?

[Flyingbike]

C'est très simple :

il y a trois paramètres pour un radiomarquage de nucléotide :

1/ le type de base (A,T,C,G,U, etc.)
2/ le type de sucre (ribose, désoxyribose)
3/ le lieu ou se trouve le phosphate marqué (alpha, beta, gamma, ce qui n'a en réalité RIEN a voir avec le type de radiation)

Sachant que
1/ tu veux marquer une sonde ADN et que
2/ les phosphates beta et gamma sont hydrolysés lors de la création de la liaison phosphodiester

tu peux exclure la moitié des propositions


Ensuite, sachant que
1/ le marquage doit se faire à partir d'une amorce double brin (une polymérase ne peut pas ajouter de nucléotides en face ou le long d'un simple brin) et
2/ l'incorporation des nucléotides se fait de 5' vers 3'

tu peux à partir des séquences des amorces trouver le seul qui peut effectivement être marqué