Bonjour,
Dans mon cours j'ai noté que lors du transfert sur un filtre de nitrocellulose, il fallait saturer les sites de fixation de l'anticorps.
Est-ce que quelqu'un pourrait m'indiquer en quoi ça consiste et quel en est le but ?
Merci d'avance !
Plus précisément il faut saturer les sites de fixation non spécifiques des anticorps, pour éviter d'avoir trop de bruit de fond et plus important, d'avoir du signal non spécifique. C'est globalement le même principe que pour les étapes de blocage en immunohisto.
Complément à mon message d'au dessus, je me rends compte qu'il est plus qu'incomplet: la membrane de nitrocellulose sur laquelle tu as transféré tes protéines est faite pour accrocher toutes les protéines de manière non spécifique, donc si tu incube tes anticorps sans avoir fait au préalable d'étape de blocage ils vont se fixer partout. C'est pour ca que pour bloquer la membrane on utilise une solution très riche en protéine (BSA, ou tout simplement du lait dilué dans ton tampon de marquage)
Le blocage des sites de fixation non spécifique des anticorps aux protéines que tu as transféré sur la membrane peut aussi se faire si nécessaire mais c'est différent.
D'accord, merci beaucoup !
