comment fontionne une RT ? (explication des étapes au thermocycleur)

[invite82334444]

bonjour

j'ai une question concernant les étapes de RT (ARN en ADNc).
j'utilise ce kit :
http://www.bio-rad.com/webroot/web/p...e/4106228C.pdf

je ne comprends pas bien à quoi servent les étapes au thermocycleur.
j'avais pensé à ça (mais je crois que c'est faux.. dites moi si j'ai raison ou pas...)

25 °C : hybridation du mélange d'amorces
42°C : synthèse de l'ADNc
85°C : séparation des brins ARN et ADNc synthétisé.

on me dit que c'est de l'ADN double brin que l'on obtient. mais je ne comprends pas ? à quelle étape se fait le deuxième brin ?
il n'y a pas d'enzyme ADN polymerase dans le kit... ?
je pensais qu'on obtenait de l'ADNc simple brin...??

merci beaucoup par avance de votre aide.
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[Flyingbike]

Si je ne suis pas fou, on on obtient un hétéroduplex ARN-ADN donc on a un ADNc monobrin...
L'étape a 85 sert aussi à inactiver la polymérase.
Il existe également des polymérase (type MMLV) a activité RNase qui détruisent la matrice ARN lors de la synthèse de l'ADNc.