Cinétique et Quantification gène et protéine in vitro Systeme CRE/LOX

[inviteab3d5542]

Bonjour !

J'aimerai évaluer in vitro, un modèle KO conditionel pour une proteine X.

J'ai une culture cellulaire issue d'animaux floxés pour la protéine X.
Je souhaite faire une cinétique représentant extinction du gène et de la protéine après ajout d'une enzyme CRE

Pour étudier l'extinction de la protéine X je fais une immunofluorescence.
Pour étudier l'extinction de la transcription de la protéine X je fais une RT PCR.

Comment réaliser une cinétique d'extinction de transcription de ma protéine X en RT PCR? J'ai du mal à comprendre comment faire.

Quant à l'immunofluorescence il me suffit de fixer mes cellules à différents temps n'est ce pas ?


De plus, Connaissez vous un article où ces expériences ont été réalisées pour que je puisse avoir un protocole ?


Merci de votre réponse,

CynMarine
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[invite9f9a03f4]

Bonjour,
puisque le principe c'est la cinétique, je vous suggère de faire RTPCR aussi en fonction du temps il fallait juste chercher comment bloquer les activités cellulaires.
Bon courage

[inviteab3d5542]

Merci de ta réponse, cependant cela ne répond pas a ma question,

J'ai du mal avec le déroulement de ces experiences quand a l'extraction et ou la fixation, comment et pourquoi...je ne sais pas si je suis très claire..