Bonjour, je me permets de déposer une question sur le forum pour obtenir quelques éléments de réponse.

En effet, l'un de mes projets expérimentaux consiste à doser les protéines grâce à un kit de quantification
l'huile étant insoluble dans l'eau il m'est impossible de solubiliser le peu de protéines présents, (je tiens à préciser que le dosage est réalisé sur des quantités exprimées en ng de protéines/mg d'échantillon) donc j'ai très peu de matière.

Dans un premier temps j'ai simplement vortexé 100µL d'huile au 1/10 dans une solution tampon pH9.3. les résultats n'était pas concluant après dosage et la solution est devenue légèrement blanchâtre

Ensuite j'ai voulu effectuer une extraction Chloroforme/méthanol/eau physiologique 0.9%, dans les proportions v/v, (2/1/0.2).
Cela ma permis d'obtenir des début de résultat mais, mon extraction témoin ne ma permit de récuperer que 40% de mon ajout protéique.

Pouvez vous me confirmer que les protéines se situe bien à l'interface eau physiologique et méthanol?
Si oui quelle technique appliqué à de petit volume je peux utiliser pour les extraire?

Une autre de mes pistes est la précipitation au sulfate d'ammonium, mais en quel pourcentage de saturation pour avoir une précipitation totale et dans quel type de solution tampon pour également solubiliser mon huile ou ma cire?

Après centrifugation (quelles sont les paramètres optimums pour former le culot?) je suppose devoir faire une dialyse pour supprimer cette forte quantité de sel dans ma solution ! pouvez vous me conseiller du matériel ou autre? je n'en ai jamais réalisé.

Je vous remercie d'avance des réponses apportées.