Test ELISA

[cecile45]

Bonjour,
J'ai réalisé un test ELISA en TP afin de déterminer la concentration d'une protéine dans un échantillon. Afin que ce test soit quantitatif, j'ai réalisé une gamme de concentration. Après mesure de l'absorbance, j'obtiens des résultats aberrants qui ne sont pas interprétables (à la fois pour ma gamme de concentration et pour mon échantillon).
A quoi est ce dû ?
Je pensais à un problème au niveau de mes dilutions, ou encore à l'anticorps qui ne fixe pas bien la protéine.
Y'a t-il d'autres choses qui pourraient fausser mes résultats ?
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[dams7325]

Bonjour,

Est-ce que tu as fait des contrôles du style : anticorps I, anticorps II, substrat (sans antigène pour vérifier si tes Ac I et II ne se fixent pas sur autre chose que ton antigène donc s'ils sont vraiment spécifique de ton antigène) / anticorps II, antigène, substrat (sans Ac I pour vérifier si ton Ac II ne se fixe pas directement sur ton antigène ou à une autre protéine) / substrat (voir s'il s'oxyde spontanément) ?

[random_postdoc]

Qu'entends tu par aberrant?

C'est difficile de dire ça à priori pour les échantillons que tu testes vu que t'es pas sensé connaître la concentration, mais si ta gamme à foirée il y a un souci technique, qui peut venir de plein de choses différentes: coating mal réalisé, dilution ratées (en général pour la gamme on fait des dilutions 1/2 en cascade donc pour se planter faut quand même y mettre du sien...), mauvaise technique de lavage, tampons de lavage et dilution mal préparés, réactifs abimés (notamment l'avidine ou streptavidine-HRP dans les dernières étapes, c'est assez fragile ce truc), etc...

En tout cas si c'est un kit acheté dans le commerce et non un truc développé maison, normalement il y a pas de souci niveau réactivité des anticorps.