Bonsoir, en biologie moléculaire nous avons étudié l'extraction de l'ADN, l'ARN et des plasmides . Bon l'ADN c'est facile mais l'ARN et les plasmides ça n'est pas très claire , j'ai fait des recherches sur le net mais ça ne m'a pas vraiment aidé ,si il y en a parmi vous qui aimerait bien m'expliquer comment se font ces 2 extractions , je leur en serais très TRES reconnaissante .
Je sais qu'en ARN comme pour l'ADN, il existe plusieur méthode:
Tu lyse tes cellules avec un réactif acide contenant de l'isothyocyanate de guanidium et du phénol. On fait une séparation par centrifugation avec du chloroforme ou du bromochloropropane. Tu obtiens une phase aqueuse (ARN), une interface et une phase organique. On prélève l'ARN puis une précipitation à l'isopropanol, puis centrifugation. On a l'ARN qui précipite, on lave le culot et on solubilise l'ARN dans du formamide désionisé.
Ce n'est pas l'unique méthode pour extraire l'ARN:
- précipitation sélective de l'ARN avec du chlorure de lithium et l'urée
- séparation de l'ARN par ultracentrifugation avec du chlorure de césium
- fixation de l'ARN à la silice
Plasmide je ne sais pas ...
Les deux techniques les plus employées en laboratoire pour extraire de l´ADN plasmidique (je ne sais pas s´il y en a d´autres) sont : l´extraction au phénol-chloroforme et l´extraction à l´aide de kits industriels, type OMEGA, Sigma-Aldrich...etc. La première permet de récupérer une plus grosse quantité d´ADN plasmidique que la seconde, mais est plus délicate à réaliser.
La réussite, c'est un peu de savoir, un peu de savoir-faire et beaucoup de faire-savoir.
