trypsine Jaune...

[invite095102c7]

Bonjour à tous,

J'ai purifié ma trypsine (colonne affinité) et je vais l'analyser par gel SDS-Page.
Quand je la met avec mon bleu dénaturant elle vire au jaune... est-ce normal?
(Mon bleu est composé de tampon Tris-HCl 0,5M pH 6.8, de B-mercaptoéthanol 0,1%, SDS 10% (w/v) dans H2O, de Glycérol (25% v/v), de bleu de bromophénol et est amené à 10 ml avec de l'eau)

Ma trypsine est telle foutu ou c'est une histoire de pH( elle se trouve actuellement dans du glycine pH2)?

nb: j'ai utiliser de la glycine pH2 car c'est ce qu'on utilisait dans mon protocole de purification mais pensez-vous que c'est mieux que je la conserve dans HCl 1mM avant de la congeler?

Merci!
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[invitee4e79868]

Bonjour,

Le bleu de bromophénol est avant tout un indicateur de pH... Qui vire au jaune à pH inférieur à 3, et au bleu à pH supérieur à 4.6.
Après, tout dépends de la concentration du tampon Tris et de la Glycine, mais si la glycine est plus concentré, le pH ne variera pas beaucoup.
Aussi, le bleu de bromophénol dissous dans du méthanol est jaune (à titre d'indication).

En espérant avoir répondu à ta question