Purification d'une enzyme

[Oib]

Bonjour,

Lors de la purification d'une enzyme, comment par mesure d'activité peut on s'assurer d'avoir obtenu la préparation la plus pure possible et comment vérifier que l'on a obtenu l'enzyme à l'état pur ?
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[noir_ecaille]

Tout dépend du protocole.

[Pfhoryan]

Bonjour,

Lors de la purification d'une enzyme, comment par mesure d'activité peut on s'assurer d'avoir obtenu la préparation la plus pure possible et comment vérifier que l'on a obtenu l'enzyme à l'état pur ?

Il faut que l'activité spécifique de l'enzyme pure (AS en u/mg) soit connue. On mesure l'activité de la préparation en unité par mL (u/mL) et on dose la concentration en protéine en mg/mL. Ensuite on fait le rapport activité/mL et mg/mL ce qui donne l'AS de la préparation.
Par exemple si on a une enzyme pure à 100 u/mg et que l'activité spécifique mesurée est de 10 u/mg, c'est que l'enzyme est pure à 10% (en masse).