dimère

[invite095102c7]

Bonjour,

Voilà j'ai fait un western blot et je trouve deux bandes: une à la taille attendu et l'autre au double. Comment je peux supposer que c'est un dimère et comment se forme des dimères de protéines?

Ce qui est le plus étrange c'est que le monomère s'observe dans le surnageant et le dimère dans la partie soluble (cytoplasme là où ma protéine normalement devrait être produite).

Merci si vous avez des suggestions ou simplement des explications pour m'éclaircir car je suis nouvelle dans ce domaine.


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[Syst.]

Bonsoir,

De quoi les protéines ont-elles été extraites ?

[invite095102c7]

Elle a été produite de manière recombinante par E.coli à partir d'un gène synthétique (cce gène code pour un inhibiteur de trypsine chez la plante)

[invite095102c7]

j'ai pris le surnageant de culture ainsi que la partie soluble (c-à-d j'ai culotter le cellules enlevé le surnageant et resuspendu dans mon tampon et recentrifuger et repris ce surnageant là)

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite095102c7]

C'est possible qu'une protéine chaperonne reste accroché malgré les conditions dénaturantes du gel SDS-PAGE??

[Syst.]

C'est possible qu'une protéine chaperonne reste accroché malgré les conditions dénaturantes du gel SDS-PAGE??

Je ne pense pas…

Je ne vois pas de réponse à votre question, désolé. (Je viens juste de finir une L2 de bio.)

[vpharmaco]

Il se peut aussi que ce soit lié a l'utilisation d'un Ac pas très très spécifique, non ?

[invite095102c7]

Pour la protéine dans le surnageant j'ai fait un Ms c'est sur que c'est ma protéine. L'autre dans la partie soluble elle est plus intense encore que ma bande qui est dans le surnageant mais je n'aurais pas le temps de faire un MS...
NB: C'est un anticorps His-tag