precipitation de petites quantités d'ADN

[franckeeuuhh]

Bonjour tout le monde,

Je dois effectuer 2 traitements enzymatiques sur du gDNA sans le digérer.
Mon problème est que les 2 buffers que j'utilise sont incompatibles. Je dois donc faire un clean-up de ma DNA prep.
Je pars avec une quantité finale de DNA de 750ng (je n'ai pas beaucoup de DNA de base).
J'ai essayé de précipiter Sodium acetate/cold EtOH 100% ON mais j'ai perdu beaucoup trop de matériel après la première précipitation et après la seconde je n'avais pas assez de matériel pour faire ma librarie!!!

Donc ma question est: Est ce que quelqu'un a une idée pour m'aider à récupurer mon DNA??? Je pensais pouvoir utiliser un kit de DNA extraction mais la quantité de matériel est trop faible... Any new idea???

Merci d'avance,

best,

Franck
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[Flyingbike]

Bonjour

tu peux peut-être utiliser du glycogène que tu rajoutes à ton ADN, il sera co-précipité par l'AcNa/EtOH et du coup l'ADN sera plus facile a récupérer.

Il existe également des kits de "nettoyage de DNA" sur colonne, avec un bon rendement, comme le MinElute Reaction Cleanup Kit de qiagen ou d'autres.
Bonne journée

[franckeeuuhh]

Merci pour la réponse, j'ai lu sur le glycogen et j'en ai dans mon -20°C donc ce n'est pas un problème, j'ai aussi lu à propos du PEG ou du tRNA.
De l'autre cöté tous les clean up kit que je connaisse sont fait pour purifier des produits de PCR jamais vu si ils étaient capable de retenir de l'ADN génomique.
Je vais me renseigner.

Meric encore