Bonjour,
Voila mon probleme : j'étudie une voie de signalisation avec les protéines A=>B=>C=>X. Je possède les cDNA pour chaque protéine A, B, et C et je les insère dans des vecteurs.
Qu'est ce que je peux ajouter à ces vecteurs pour rendre la production de A, B et C sensible à eIF4E ?
Merci
Qu'entends tu par sensible ?
Si je comprends bien tu veux que ta production de protéines soit modulée par l'expression ou non d'eIF4E ?
Le plus simple serait donc d'avoir un promoteur inductible pour eIF4E (je ne sais pas si cela existe) afin de pouvoir allumer ou non la production de ce facteur.
Voici la question :
Mentionnez deux éléments que vous ajouteriez à ces cDNAs pour rendre la production de A, B, et C sensible à eIF4E à plusieurs niveaux ? (noter que les ARNs correspondants posséderont déjà une coiffe et une queue polyA).
Le problème c'est qu'on nous précise que nous avons cloné A, B et C dans un vecteur d'expression standard, et dans chaque cas avec le même promoteur qu'on ne peut pas modifier.
Le transport des ARNm eIf4E-dépendant dépend de CRM1(transporteur). Je pensais donc a ajouter dans le vecteur CRM1 pour le surexprimer et amplifier l'export des ARNm dans le cytoplasme. Mais je ne sais pas si c'est une bonne méthode, et il me manque toujours un élément.
