Génétique

[loucie]

Bonjour !

J'ai un examen universitaire dans quelques jours et je bloque sur un truc depuis un petit temps!

Alors voilà: Pour séquencer un génome humain (bcp de paires de bases), on peut utiliser la stratégie "clone by clone".
Voici les étapes que j'ai compris:
1) On coupe aléatoirement UNE SEULE molécule d'ADN étudiée en petits fragments de 1000 nucléotides
2) On insère dans un vecteur identique (BAC) chaque fragment pour un faire des clones
3) On en séquence directement quelques-uns par sanger OU HindIII les coupent puis cartographie physique par électrophorèse?
4)...

J'ai épluché beaucoup de livres, de sites internet mais nulle part j'ai trouvé un protocole "étapes par étapes" clairs...
Savez-vous en quoi consiste l'étape 3 et dans quel but?

Merci beaucoup à tous
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[aro31]

1ere étape : tu construit la banque de BAC, a partir de l'ADN génomique de ton animal
2eme etape : tu ordonnes ces BACs avec une stratégie de fingerprinting (digestion de chacun de ces bac par une enz (hindIII par ex) et tu compares les profils pour rechercher les ressemblances et donc les bacs chevauchant). tu peux aussi les ordonner avec d'autres stratégies, hybrides irradiés par exemple
3eme étape : tu séquences chaque BAC en faisant des sous clonages pour avoir des fragments séquençables. en général, sous clonage de façon à avoir des fragments chevauchants
4eme étape : tu analyses les sous clones de chaque bac pour reconstituer la seq de chaque BAC. puis tu analyses les séquences de tes bacs précédemment ordonnés pour reconstituer la séquence du chromosome.

cette stratégie a été effectivement utilisée pour le génome humain et quelques autres mais n'est plus d'actualité.