Trypsine ou Pronase

[invitebe98b265]

Bonjour,

J'ai un TP de biochimie à faire où on doit purifier de l'ADN et à une certaine étape, on ajoute de la pronase à l'ADN pour briser les peptides en solution. Par la suite, on fait une extraction au phénol/chloroforme pour enlever les protéines et lipides de la solution contenant l'ADN. Alors, j'aimerais savoir:

1. Si on utilise de la trypsine au lieu de le pronase, cela fait en sorte que les protéines sont hydrolysées en de moins petits fragments. Ma question est: quel impact le fait d'avoir des fragments de protéine plus gros a sur le reste de la purification? Est-ce que l'extraction au phénol/chloroforme sera moins efficace? Si oui pourquoi?

2. Pourquoi l'extraction phénol/chloroforme est plus efficace que l'extraction au phénol seul?

Merci de votre aide
-----

[Flyingbike]

1 - cela dépend de ce qu'on fait après avec l'ADN. On peut aussi extraire sans protéases, cela fonctionne...
2 - le chloroforme est un excellent solvant des membranes et des lipides en général

[invitebe98b265]

Avec l'ADN purifié on fait des analyses au spectrophotomètre pour trouver la pureté de l'échantillon et une analyse au gel d'agarose.