bonjour,
j'ai une question qui me taraude, en fait quelle est l'utilité de la courbe de Michaelis, je me dis qu'on peux calculer la Vmax ainsi que toutes les vitesses initiales, pour des concentrations de substrat données dans les conditions expérimentales, or que mon prof m'as dis qu'il servait a trouver la Vmax et le Km
Donc, au départ quels sont nos inconnus (et que veut-on trouver) à partir de notre courbe?
Merci d'avance.
Les données expérimentales c'est l'ensemble des v0 pour toutes les concentrations en substrat testées.
Les inconnues c'est Km et vmax. Et comme tu le sais, Km c'est la concentration en substrat pour laquelle v0 = vmax/2 (au passage, vmax c'est aussi une v0, c'est la v0max !).
d'accord, mais comment peut on déduire la V max (une Vo maximale comme vous l'avez dit) puisqu'on peut pas atteindre une concentration infinie de substrat? (ou est-ce que lorsque les concentrations deviennent trop grande, les V0 se rapproche très nettement qu'on peut les considérer tel une V0? )
Vmax est atteinte avant que [S] = infini, heureusement !
oui, et on s'en rendra compte dès que les V0 commencent à clairement se rapprocher d'une certaine valeur qu'ils ne dépasseront pas, et qu'on identifiera comme étant la Vmax, c'est ça?
Oui, on arrive à une asymptote d'équation v0 = vmax !
Sinon on utilise souvent la représentation de Lineweaver Burk où on exprime 1/v0 en fonction de 1/[S]. Ça a l'avantage de linéariser la courbe et du coup 1/vmax est l'ordonnée à l'origine de la droite tandis que - 1/Km est l'abscisse à l'origine.
Ah oui d'accord du coup on peut préparer deux solution à [S] différentes, mesurer les V0 et c'est suffisant, car des deux points, on peut tracer la courbe de Lineweaver et Burk, et en déduire les Vmax et Km, c'est ça le raisonnement n'est-ce pas?
En théorie, on peut tracer une droite à partir de deux point, mais en pratique, il y a toujours des imprécisions de mesure, il vaut donc mieux avoir plusieurs points. C'est juste que, pour un même nombre de points, c'est plus facile de tracer une droite qu'une courbe.
Oui vous avez raison,
sinon concernant la cinétique des enzymes certes j'ai vu la michaelienne et l’allostérique, mais pourquoi a t-on fais cette distinction entre les enzymes mis à part leur différence de site actif? en plus y a t-il une autre sorte de cinétique (sur quelle base sont-ils classés) ?
merci encore
Si on a fait cette distinction, c'est que justement, par les mesures expérimentales, on arrivait à deux types de courbe suivant les enzymes (michaeliennes et allostériques). Mais on début les gens n'y comprenaient pas grand chose. C'est, entre autres, Jacques Monod (co-récipiendaire du Prix Nobel de médecine pour la découverte de l'opéron lactose) qui a élucidé le mécanisme d'action des enzymes allostériques dans les années 60.
Concernant d'autres cinétiques, j'avoue mon ignorance.
alors si j'ai saisi, du fait de leur site actif composé, les enzymes allostériques ne donnent pas les mêmes résultats expérimentaux que ceux obtenus dans le cas d'une enzyme Michaelienne avec un seul site actif simple, est-ce bien cela?
Oui c'est ça, ça vient du fait que les enzymes allostériques sont des oligomères (avec toujours organisation symétrique). Prenons l'exemple d'un tétramère avec un site catalytique par monomère. Le tétramère existe sous deux conformations extrêmes : un état tendu, où les sites actifs ont peu d'affinité pour le substrat, et un état relâché, où l'affinité est maximale. Dès qu'un monomère passe d'un état à l'autre, il entraîne en chaine les trois autres. Càd que dès que un substrat a pu se fixer sur un monomère, ça change la conformation des trois autres qui vont pouvoir accepter beaucoup plus rapidement les trois autres substrats !
Du coup on a un effet "tout ou rien" que traduit la courbe sigmoïde. On se rend compte qu'avec une variation de concentration très faible (entre le moment où [S] est juste inférieure au point d'inflexion et celui ou elle est supérieure) la v0 change très rapidement.
Donc si on prenait une enzyme à structure quaternaire, mais à organisation Asymétrique, on reviendrait vers la courbe Michaelienne? Et puis, en fait quand on parle d’effecteur allostérique, bien que ce soit un agent chimique qui agit sur l'activation ou l'inhibition de l'enzyme, est-ce que cela concerne les cofacteurs càd les coenzymes et les ions métalliques, ou bien ce sont carrément d'autres molécules différentes des cofacteurs?
Merci beaucoup
Ps: on a dit en cours que les enzymes Michaelienne sont tertiaire et j'en doute.
Concernant la question générale sur l'asymétrie, je ne sais pas
En revanche, j'ai en tête un exemple d'enzyme oligomérique (2 octamères !) dont la cinétique est michaellienne : la RubisCo (ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygénase) ! Il s'agit de l'enzyme catalysant la fixation du CO2 chez les organismes photosynthétiques (c'est d'ailleurs la protéine la plus rependue sur Terre !).
Concernant les effecteurs, ça peut être n'importe quoi. Ce sont souvent des composés en aval des voies métaboliques permettant un rétrocontrôle négatif.
Ok Merci la RubisCo qui nous sauve la vie, et répond a ma question, donc on peut affirmer que les enzymes michaeliennes peuvent être quaternaires.
Merci beaucoup !!
