Mise en évidence de l'activation de Raf

[Flyingbike]

Mais non pour le WB tu utilises des protéines totales, pas de purification ! C'est ça qui te perturbe ?
-----

[Meiosis]

Mais si c'est les protéines totales pourquoi ce message :

1) non j'ai bien compris; mais vi qu'en général on n'immunoprécipite pas en excès d'anticorps, tu vas te retrouver avec la meme quantité de p-Raf partout. Ce que tu veux c'est un "échantillon" des p-Raf pour mesurer leur activité

Moi j'avais compris on lyse les cellules, on purifie avec une colonne comportant des anticorps reconnaissant les deux formes pour avoir un mélange p-raf + raf représentatif de telle condition.
J'avais vraiment compris qu'on purifiait pour n'avoir que des raf sur le gel, sinon où placer la purification en fait ?

[Meiosis]

ah mais non je crois que je dis n'importe quoi ! La purif ce serait que pour la deuxième technique de kinase assay pour n'avoir que les raf, en WB pas besoin vu que les anticorps spécifiques vont marquer que ça et comme c'est en excès y'a plus le problème de l'interprétation du taux constant de raf. Je crois que j'ai compris.

[Flyingbike]

Oui en effet ! T'as compris