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Transgenèse : altération du génome



  1. #1
    Quentin.B

    Question Transgenèse : altération du génome

    Bonjour,
    Je me permets d'ouvrir ce sujet à propos de la transgenèse afin de vous soumettre une question. En effet, lorsqu'on souhaite créer une souris CRE tissu-spécifique (ou lors d'une transgenèse additive/classique plus généralement), comment peut-on être certain que le transgène ne provoque pas de mutation ou d'altération du génome ? C'est à dire, comment vérifier que malgré l'insertion (aléatoire) du transgène, le génome de l'hôte reste "intact" ?
    En espérant avoir été clair dans mes propos, je vous souhaite une bonne année.
    Sincèrement

    PS : j'appelle souris CRE tissu-spécifique, une souris exprimant la CRE (recombinase) sous l'action d'un promoteur tissulaire spécifique.

    -----


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  3. #2
    Flyingbike

    Re : Transgenèse : altération du génome

    bonne question ! en fait heureusement il y a beaucoup plus de chance que ça tombe en dehors d'un gène. Mais oui en effet, c'est un truc qu'il est bien de vérifier, pour cela on peut par exemple amplifier par PCR la région en utilisant un primer inclus dans le transgène, pour explorer le voisinage.

  4. #3
    Quentin.B

    Re : Transgenèse : altération du génome

    J'avais bien pensé à la PCR, mais si l'on place un seul primer, quand s'arrête l'amplification ? De plus, l'amplicon en lui même ne sert à rien, alors procède-t-on à un séquençage (puis confrontation aux banques de données) pour positionner le site d'insertion du transgène ?
    Merci

  5. #4
    Flyingbike

    Re : Transgenèse : altération du génome

    oui je pensais a séquençage, mais j'ai pas encore récupéré tous mes neuroneS... On peut avancer comme cela petit a petit en prenant un primer un peu plus loin chaque fois

  6. #5
    Quentin.B

    Re : Transgenèse : altération du génome

    D'accord, merci pour l'info sur le séquençage ! Mais pour le primer, comment peut-on en choisir un en dehors de la séquence du transgène puisqu'on ne sait pas où celui-ci s'est inséré ? C'est justement ce que l'on cherche à savoir.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Flyingbike

    Re : Transgenèse : altération du génome

    eh bien tu n'en prends pas, tu fais des lectures dans un seul sens ! Contrairement a la PCR pour amplification, en Sanger tu n'as pas besoin d'amorce de l'autre coté

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