Bonjour, je suis en L2 de biologie et je galère sur l'un de mes exercices concernant l'amplification d'ADN, le clonage de ce fragment...Voici l'énoncé :
Exercice 1
1-La séquence du gène de la capside du virus V est :
5’atgggtaagtttctcgccactttgattt tattcttccagttctgccccctcattctcg gtgattacagccccagctgctgtactctca caattggagtctcctcataccactctaaac cctgcaatcctgcccagccagtttgttcgt ggaccctcgacctactggccctttcagcgg atcaggccctacagcccccctgccctaacc tagtaggttactccggctaccatgccacct attccctatatctatttcctcattggatta aaaagccaaaccgaaatggcggaggctatt attcagcctcttattcggacccttgttcct taaaatgcccatacctagggtgccaatcat ggacctgccccta3’
Définir des amorces pour amplifier cette séquence en totalité.
2-Vous voulez cloner le fragment d’ADN amplifié au site EcoRI ( G |AATTC ) d’un vecteur (il n’y a pas de site EcoRI dans ce gène). Comment allez-vous procéder pour le choix des amorces? Ecrire la séquence des amorces et noter en rouge les modifications par rapport aux précédentes
Pour la première question, je n'ai aucun problème. Voici ce que j'ai trouvé :
Amorce sens --> 5' ATGGGTAAGTTTCTCGCCAC 3'
Amorce anti-sens --> 5' TAGGGGCAGGTCCATGATTG 3'
C'est la deuxième question qui me pose problème. Je sais que les séquences reconnues par EcoRI sont : 5' GAATTC 3' et 3' CTTAAG 5'. Mais dans mon fragment d'ADN je ne trouve par ces sites du coup je vois vraiment pas comment je dois procéder.
Est-ce que quelqu'un pourrait m'aider s'il vous plait?
Merci d'avance
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Envoyé par vinssss 