Bonjour tout le monde,
actuellement je suis en stage et notre labo ne contient pas d'apareils de fabrication des glaces ce qui fait je suis obligé de préparer le mix de la PCR-RFLP sans glace.
Est ce que cela pourrait fausser mes résultats et qu'il est l’intérêt de la glace.
Merci à vous
Dernière modification par Flyingbike ; 07/02/2016 à 12h46.
En principe cela dépend beaucoup de votre polymérase.
Historiquement on monte les mix sur glace pour inhiber toute activité polymérase, qui pourrait produire notamment a des produits aberrants, jusqu'a ce que le mix soit complet et que le cycle soit lancé.
Maintenant, la plupart des polymérases sont "hot-start", c'est à dire qu'elle n'ont aucune activité polymérase avant d'être activées par la chaleur (par exemple la phase a 95° en début de cycle). C'est comme une sécurité au démarrage si vous voulez...
Donc regardez la doc de votre enzyme, cela devrait déjà vous éclairer.
La vie trouve toujours un chemin
Merci monsieur Flyingbike pour la réponse
Un autre point expliquant l'utilisation de la glace, c'est que tout les produits utilisés dans la PCR sont sensibles aux variations de températures. La même chose est observé au niveau de l'ADN, ou les variation de température entraîne une dégradation plus importante de l'ADN. Contrairement au laboratoire hospitalier ou d'analyse, qui ont une grande quantité de patients et donc de renouvellement de réactifs. Les laboratoires de recherche doivent utiliser les meilleurs conditions pour garder les réactifs utilisables longtemps.
Merci Madame, Monsieur,
Bonne réponse vous m'avez bien répondu !!
