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Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits



  1. #1
    ghotib

    Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits

    Bonjour,

    je suis à la recherche de retours utilisateurs ou conseils.

    Je souhaite réaliser des tests d’expressions de protéines recombinantes (système bactérien) en format plaque 96 puits (différents vecteurs, TAG, condition de culture, souche bactérienne etc). Je suis à la recherche d’un système permettant, après la lyse du culot bactérien, de séparer rapidement les fractions solubles et insolubles des protéines, directement en système 96 puits.

    Je réalise déjà des tests d'expression de protéines recombinantes (sreening des meilleures conditions) mais en format tube...et ça prends beaucoup de place pour gérer la quantité d'échantillons. Habituellement, je réalise une étape de centrifugation à 15000g 30min 4°C en tubes, après la lyse bactérienne via un tampon de lyse commercial, pour séparer les fractions solubles/insolubles et analyser dans quelles fractions se trouvent la protéine produite (par SDS PAGE/WB/ELISA).

    Mon problème est le suivant, si je fais des test d'expression en format plaque 96 puits, comment séparer la fraction soluble et insoluble après la lyse bactérienne...car je ne possède pas de centri/rotor permettant de faire tourne une plaque 96 puits à une telle vitesse (15000g). Existe t-il un système permettant de séparer les fractions solubles/insolubles directement en plaque 96 puits. Est ce qu'il y a des utilisateurs qui ont l'habitude de faire de la production de protéines recombinantes en plaques?

    Merci d'avance pour votre retour,
    Cordialement,

    -----


  2. #2
    vpharmaco

    Re : Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits

    Une source d'inspiration ? http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11567530
    NB : Les plaques de filtration coûtent un bras. Investir dans un rotor est peut être plus rentable si la centri est déjà dispo ...
    Dernière modification par vpharmaco ; 28/07/2016 à 17h36.

  3. #3
    Flyingbike

    Re : Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits

    En plaque ça sera un swinging bucket et je ne pense pas que ça accepte plus de 10 000xg...
    La vie trouve toujours un chemin

  4. #4
    ghotib

    Re : Culture bactérienne et protéines recombinantes en plaque 96 puits

    Bonjour,

    merci pour vos retours!

    Concernant le rotor, je me suis renseigné...avec l'équipement présent au labo, je peux mettre un rotor pour la centri des plaques qui monte à une vitesse max de 6500g...a priori pas suffisant...

    Quant aux plaques de filtration, tu vas peut être rire, mais je n'ai pas accès à la publication que tu me mets via le lien...(je n'ai pas de compte pubmed)...est ce que tu pourrais me donner la référence si possible de ces plaques de filtration qui apparaissent dans cette publi?

    encore merci.
    Cordialement,

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