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inhibiteurs de la qPCR




  1. #1
    wiembenamara

    inhibiteurs de la qPCR

    salut tout le monde,

    je voudrais bien savoir quels sont les inhibiteurs d'une PCR quantitative. Est ce que l'ARN peut inhiber la qPCR?
    Sachant que la qPCR sera utilisée pour quantifier le nombre de copies de gènes et que l'ADN génomique a été extrait par la méthode Salting out

    J'ai pas fait de traitement RNAse et je crains que ça dégrade l'ADN plutot que l'ARN . D'arès mes lectures une RNAse pourrait etre contminée par des DNAses

    merci de m'aider et de me partager vos experiences

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    Flyingbike

    Re : inhibiteurs de la qPCR

    il y a plein de choses qui peuvent inhiber une PCR, l'ADN, l'ARN probablement, les sels, etc.

    Le concept de la RNase est qu'elle dégrade..... l'ARN. Pas l'ADN. Si vous avez une RNase commerciale elle est évidemment sans DNase !

    Pourquoi cette technique d'extraction ? c'est de l'ADN de quoi ?
    La vie trouve toujours un chemin

  4. #3
    sebastien_cha

    Re : inhibiteurs de la qPCR

    Bonsoir,

    Oui effectivement l'ARN peut diminuer léfficacité de ta qPCR. En fonction de l'enzyme que tu utilise les résultats peuvent différer.
    Pour les autres inhibiteurs, cela va dépendre également de la méthode d'extraction utilisée (concentration en sel, résidus de solvamts,...).

    SeB


  5. #4
    wiembenamara

    Re : inhibiteurs de la qPCR

    C'est l'ADN génomique d'un insecte (une mouche gallifère ) . L'extraction d'ADN avec le CTAB n' a pas marché donc j'ai suivi le protocole du salting out ( precipitation des débris cellulaires avec le NaCl et lavage avec l'ethanol absolu pus l'ethanol 70)

  6. #5
    wiembenamara

    Re : inhibiteurs de la qPCR

    bonsoir,
    je vous remercie de votre réponse mais j'ai pas compris de quel enzyme vous parlez? la taq polymérase?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    sebastien_cha

    Re : inhibiteurs de la qPCR

    Bonjour,

    Oui certaines taq sont optimisées au niveau du buffer pour diminuer l'impact d'ARN ou autres.

  9. #7
    wassila filali

    Re : inhibiteurs de la qPCR

    Svppp je veux une réponse a cette question .. comment est ce que avec une pcr ou une rt pcr on peut savoir s'il ya un cancer ou non autrement dit comment on procède pour analyser un échantillon avc une pc ou une rt pcr ?? je veux comprendre le protocol ps: Chuui tres nulle en ce domaine de la bio mol svp j'aimerai bien que la reponse soit très claire et merci d'avance ☺☺☺

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