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demasquage antigénique



  1. #1
    fleur3838

    demasquage antigénique


    ------

    Bonjour à tous,
    J'ai besoin de traiter mes lames à la chaleur, j'utilise le micro-ondes et le tampon citrate pH:6
    Toutes mes coupes se décollent!!! Que puis je faire pour éviter ça?

    Mes coupes sont fixées à l'éthanol, inclues en parrafine.

    Je souhaiterai vos conseils.

    -----

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  3. #2
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : demasquage antigénique

    Quel type de lames ?
    Quelle épaisseur ? Elles passent au chaud avant le déparaffinage ?
    La vie trouve toujours un chemin

  4. #3
    fleur3838

    Re : demasquage antigénique

    merci Flyingbike

    voici quelques explications:

    les lames sont des superfrost
    les coupes font 5 µm d'épaisseur
    j'ai fait des tests sur des lames et pour certaines je n'ai aucun problème, donc je pense que cela ne vient pas des lames ni de l'épaisseur des tissus.
    le déparrafinage se fait avant le chauffage
    les coupes se décollent au moment du chauffage au micro-ondes

    voici le descriptif de mon protocole:

    1er bain: toluène: 10 minutes
    2ème bain: toluène: 10 minutes
    3ème bain: ethanol absolue 100°: 10 minutes
    4ème bain: éthanol 95°: 5 minutes
    5ème bain: éthanol 70°: 5 minutes
    6ème bain: H2O distillée: 5 minutes
    7ème bain: tampon citrate au micro-ondes 20 minutes (5x4 minutes) jusqu'à ébullition (en sachant que l'ébullition arrive au bout de 5 minutes environ)

  5. #4
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : demasquage antigénique

    Je parlais de l'étape avant le déparaffinage, une fois que les coupes sont placées sur lames, vous ne les passez pas à l'étuve ou sur un banc chauffant ?

    Les superfrost ont 2 faces différentes. Les coupes sont sur la bonne face ?
    La vie trouve toujours un chemin

  6. A voir en vidéo sur Futura
  7. #5
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : demasquage antigénique

    Quel type de tissu ?
    La vie trouve toujours un chemin

  8. #6
    fleur3838

    Re : demasquage antigénique

    après avoir fais les coupes je mets les lames dans une étuve 24h à 40°
    les coupes sont du bon côté de la lame
    ce sont des coupes d'oreilles de souris
    j'ai déjà fait quelques tests et cela fonctionnait mais pas pour toutes les lames,
    dès que je les passent au micro-ondes les coupes se décollent

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  10. #7
    Flyingbike
    Modérateur

    Re : demasquage antigénique

    Dernière piste : pas de bulles sous les coupes ? Notamment au moment du repêchage dans l'eau avant dépôt sur lame
    Sur le principe tout à l'air ok je vois pas trop ce qui pourrait causer ça...
    les lames sont pas trop vieilles ?
    La vie trouve toujours un chemin

  11. #8
    fleur3838

    Re : demasquage antigénique

    mery Flyingbike,
    pour certaines j'ai quelques bulles mais cela ne décollent pas les coupes que j'ai déjà testé sur les lames.
    je vais me répéter:
    j'ai fait des tests sur des lames et pour certaines je n'ai aucun problème, donc je pense que cela ne vient pas des lames ni de l'épaisseur des tissus.
    en tout cas merci pour ton intervention même si je n'ai pas obtenu de réponse.
    bonne journée

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