Que veut dire ... ?

[invite307f1ff0]

Bonjour à tous,

Alors voilà j'ai un petit soucis mêlant biotechnologie et anglais.
Je travail sur un article scientifique (en anglais donc), et je bloque sur la phrase suivante :

"The CaMV 35S promoter of pSAT4-MCS was replaced by a chloroplast Prrn promoter, cloned as a AgeI/NcoI PCR fragment amplified using forward 5'-TCACC [...]"

Le but ici est d'intégrer le promoteur Prrn dans le vecteur PSAT4-MCS à la place du promoteur CaMV 35S.
Seulement je ne comprends pas ce que veut dire "Cloned as a AgeI/NcoI PCR fragment amplified".

--> Est-ce qu'on clone Prrn dans le vecteur en utilisant les enzymes AgeI et NcoI PUIS on amplifie par PCR ?
--> Ou, est-ce que qu'on effectue une PCR en présence des enzymes (ce qui les amplifie) ?

Je vous remercie vivement d'avance.

Bonne journée,
Pierre.
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[Flyingbike]

on amplifie le fragment par PCR en ajoutant des séquences AgeI et NcoI dans les amorces, ce qui permet après digestion du produit de PCR (et du vecteur) par ces amorces de le cloner

[invite307f1ff0]

Bonjour,

Merci beaucoup pour votre réponse.
Seulement j'ai un peu de mal à comprendre une chose, comment des amorces peuvent digérer le produit de la PCR ? Puisqu'on intègre les séquences de AgeI et NcoI (et pas les enzymes elles-mêmes).

Encore une fois mille merci.

PL

[Loupsio]

Les amorces ne digèrent rien, les amorces sont fabriqués par le commercant selon la sequence que tu souhaite et ensuite tu t'en sers pour amplifier une séquence,
en rajoutant certains nucléotides a tes amorces (qui representerons les extrémités de tout ce que tu auras amplifié) tu auras donc ajouté des petites séquences de part et d'autre de ton gène,
dans ton cas, ces sequences ajoutés aux amorces correspondent a des sites de restriction

il s'agit d'amplifier un gène et de lui ajouter des sequences de restrictions a ses extremités,
grace a ces séquences de restriction , et sous l'actions d'enzymes de restrictions ou de ligases, tu pourras intégrer la sequence que tu as amplifié, à l'interieur d'un vecteur, ou au contraire l'en extraire
sans ces sites de restriction, tune peux pas les intégrer dans un vecteur, ni couper a cet endroit précis,

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite307f1ff0]

Bonjour,

Merci beaucoup Loupsio pour cette réponse détaillée, j'ai finalement compris !
Et merci encore à vous Flyingbike !
Je note en résolu !
Edit : Apparemment je ne peux pas.
Bien cordialement,
PL