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Electrophorèse sds-page de la MMP2



  1. #1
    BioChiara

    Electrophorèse sds-page de la MMP2

    Bonjour!
    Après avoir fait une transfection ce cellules, j'ai récupéré des surnageants contenant mes protéines proMMP2 et deltaproMMP2. J'ai analysé mes protéines sur un zymogramme contenant de la gélatine (substrat préférentielles de mes protéases) et j'ai pu observer leur activité grâce à des spots de digestion sur mon gel coloré au bleu de Coomassie.
    D'autre part j'ai fait une électrophorèse sur gel SDS-PAGE sans gélatine coloré également au bleu de Coomassie, mais cette fois ci je n'ai observée aucune bande de migration. Je ne parviens pas à expliquer pourquoi je n'ai pas pu observer le migration de mes protéines!
    Je suis censée pouvoir déterminer la pureté de mon échantillon avec ces données...
    Quelqu'un connaitrait-il les raisons pour lesquelles il est possible de ne pas observer de bande de migration lors d'une électrophorèse?

    Merci!!

    -----


  2. #2
    Flyingbike

    Re : Electrophorèse sds-page de la MMP2

    sur le gel Page vous vouliez voir les MMP au bleu de coomassie ? ou toutes les protéines ? j'imagine que c"'est pour normaliser la quantité de MMP par rapport au total.?

    Le bleu de coomassie est un colorant très peu sensible, il colore certes les protéines mais on ne voit à l'oeil que les bandes principales. Surtout que dans un surnageant cellulaire, la quantité de protéine est pas suffisamment importante pour voir des bandes. Peut être avec du nitrate d'argent ?
    La vie trouve toujours un chemin

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