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Western Blot avec membrane PVDF



  1. #1
    Huevos

    Post Western Blot avec membrane PVDF

    Bonjour tout le monde,

    J'ai une question concernant des résultats en western blot.
    Je transférais mes protéines sur une membrane de nitrocellulose (transfert semi-sec avec Trans Blot Turbo System de Bio-rad) mais j'ai testé depuis peu la membrane de PVDF (même méthode de transfert). J'ai incubé mes membranes avec plusieurs anticorps primaires (toujours les même anticorps et 1 anticorps primaire/membrane). Cependant après révélation, je retrouve sur toutes mes membranes le même genre de motifs, des bandes très épaisses entre 60 et 80 kDa par exemple. A cause de ça je n'arrive pas a détecter la présence de mes protéines d'intérêt, les bandes étant "noyées" dans les plus épaisses. Je n'avais pas ce problème, voir très peu, en utilisant les membranes de nitrocellulose.
    Etant dans l'incapacité d'utiliser à nouveau des membranes de nitrocellulose pour le moment, est ce que ce signal aspécifique peut provenir de la membrane de PVDF ?
    J'ai déjà entendu dire que la membrane de PVDF pouvait mieux retenir certaines proteines, est- ce le cas ? Avez-vous déjà rencontré ce problème et si oui, comment peut-on éviter au mieux d'avoir un signal aspécifique ?

    Merci d'avance pour vos réponses !

    Charlène

    -----


  2. #2
    Flyingbike

    Re : Western Blot avec membrane PVDF

    vous colorez la membrane après transfert (ponceau) ? l'allure est normale ?

    vous avez de la membrane en vrac ? le PVDF sec doit s'activer à l'ethanol avant utilisation je crois

    quelles conditions de transfert ?
    La vie trouve toujours un chemin

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