Dosage ELISA
Bonjour,
Dans le cadre de mon stage en clinique vétérinaire, j'ai travaillé sur un dosage ELISA de la progestérone (hétérogène, semi-quantitatif, indirect et par compétition)
Je ne connais pas la nature du conjugué pour cause,les informations données par le fournisseur sont complètements incohérentes...
Nous avons une cupule sensibilisé avec des Ac anti-progestérone. On ajoute une goutte d'échantillon de plasma du chienne (taux de progestérone à déterminer) et 4 gouttes de conjugué inconnu ( infos fournisseur : Ac anti-progestérone marqué avec je ne sais quoi. alors que nous avons un dosage en compétition et non en sandwisch).
On incube 15 min a température ambiante... On rince 3 fois... On sèche... Puis on rajoute du substrat ( on a réussi à savoir que c'était de la phénolphtaléine monophosphate alors que le fournisseur nous disais : PNPP. Le PNPP : c'était impossible en raison de la jolie coloration du test qu'ils sont censé vendre
On ré incube 10 à 15 min et on observe la coloration rose que l'on compare avec 2 autres cupules qu'on a réaliser en parallèle : une avec une solution de progestérone seuil haut et l'autre au seuil bas.
Les colorations obtenues sont bien rose (comme je l'ai dis au-dessus) donc PNPP qui est jaune est éliminer !
A notre avis le conjugué serais, pour être de la compétition, un complexe : Ac anti-progestérone déjà fixé avec de la progestérone.
Le complexe se fixerais donc aussi au Ac adsorbé au fond de la cupule en fonction du taux de l'échantillon.
Maintenant place au question: A votre avis le conjugué, en prenant bien la Phénolphtaléine comme substrat, serait marqué avec QUOI ????
Sachant que la Phiphi réagit avec du NaOH...
Merci déjà à tous ceux qui auront pris la peine de lire le pavé et encore plus à ceux qui ont pris la peine de réfléchir, voir d'y répondre
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