Bonjour ! Je suis en train d'étudier un article scientifique que j'ai pioché sur Pubmed et je rencontre quelques difficultés à saisir la méthodologie, je m'explique :
On réalise une expérience de screening. Des clones de cellules cancéreuses ont été modifiés pour exprimer Cas9, on transfecte ensuite dans ces mêmes cellules une librarie d'ARNguide dans un vector lentivirus. On sélectionne ces cellules cancéreuses avec soit des Lymphocytes T qui attaquent spécifiquement ces cellules cancéreuses (Ltx) soit des Lymphocytes T non spécifique (contrôle (Ltc)).
On fait ensuite un séquencage du génome des cellules cancéreuses survivantes pour voir si certains ARNg seraient plus ou moins présents que d'autres afin d'en déduire l'importance de certains gènes dans la résistance ou la sensibilité à la destruction des lymphocytes T spécifiques des tumeurs.
Je ne comprends pas la manip qui consiste à transfecter une bibliothèque d'ARNg : ne risquons nous pas d'avoir un Knock-out de tout le génome ?? Et même si seulements quelques ARNg s'intégraient, le fait d'avoir d'avoir plusieurs KO par cellule modifierait profondément son fonctionnement non ? (L'association de plusieurs KO particuliers pouvant avoir des conséquences que les KO pris séparemment n'auraient pas...)
Merci pour votre aide, a plus =)
-----
)