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Carte de restriction



  1. #1
    cerisa

    Carte de restriction


    ------

    Bonsoir, je n'arrive vraiment pas à comprendre la notion de carte de restriction, en fait il y a un exemple particulier qui me tracasse, disons que nous avons une portion d'ADN à étudier et que nous avons deux cas deux figures qui se présentent soit la formation soit l'abolition d'un site de restriction et nous allons faire une double digestion avec deux enzymes. Disons que l'enz 1 coupe aux deux extremités et le site de restriction sur lequel va agir une enz2 soit formé soit aboli va se trouver au milieu, d'apres ce que j'ai compris, si le site est aboli= pas de coupure au milieu par l'enz2 et nous aurons juste les coupures aux extremités par l'enz1 ce qui va former un seul fragment, maintenant si on l'hybride avec une sonde, qui s'hybride avec la partie vers le milieu de le séquence on aura logiquement un seul trait dans l'electrophorse non? vu que la sonde va s'hybrider avec le fragment ! alors que dans mon cours j'ai cet exemple et avec il y le résultat de l'éléctrophorèse ou il y a deux bandes, j'arrive vraiment pas à comprendre d'ou vient la 2eme ! merci j'espere avoir été claire!
    Merci à vous e bonne soirée.

    -----

  2. #2
    YB17

    Re : Carte de restriction

    Bonsoir. Je suis pas certain d'avoir tout compris non plus ...
    Il faudrait quelques précisions, notamment quel est ton ADN de départ ? (Génomique, plasmide ), quel est ta sonde ?
    Tu ne le mentionnes pas mais tu ne fais pas simplement une électrophorese, si ? Y'a un southern blot normalement dans ton histoire (c'est un détail important...), non ? Parce que tu nous parles de bandes que tu vois en électrophorèse et du coup je ne vois pas en quoi ta sonde est utile....
    En gros (sauf dans des cas particuliers qui ne te concerne pas je pense), une electrophorese classique te permet de visualiser tous les fragment d'ADN (ta sonde ne sert à rien car elle ne se fixe sur rien). Un Southern blot te permet grâce à une sonde de visualiser uniquement des fragments ayant une séquence complémentaire à ta sonde (là, ta sonde est utile).
    Précise donc bien dans quel contexte tu vois les bandes dont tu parles, électrophorese ou Southern.

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