Densité optique et croissance bactérienne

[inviteef7aef59]

Bonjour, je suis stagiaire en biotechs et je me familiarise avec la culture bactérienne et le suivi de la croissance par la mesure de la densité optique, j'ai lu sur certains sites universitaires que la densité optique ne doit pas dépasser 0.5-0.6 car cela dépasse la linéarité de la croissance bactérienne et je ne serais plus dans la phase exponentielle, donc pour faire ma première mesure au temps zéro, je dois dois sortir mes bactéries assez tôt pour avoir un DO de 0.5-0.6, après pour les autres mesures, je dois faire des dilutions si la densité optique devient plus grande que 1.0, mais ces dilutions je dois les faire pour la mesure de la DO, ou je dois diluer ma culture de bactéries dans du milieu de croissance? Je ne comprends pas très bien pourquoi je dois continuer à obtenir des DO <1.0
Qqn peut m'expliquer please?
Merci d'avance.

-MARIE
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[Flyingbike]

ben en fait... ca dépend surtout de ce que vous voulez faire avec les bactéries...?

et de l'espèce en question, également...

[FARfadet00]

Bonjour,

j'ai lu sur certains sites universitaires que la densité optique ne doit pas dépasser 0.5-0.6 car cela dépasse la linéarité de la croissance bactérienne et je ne serais plus dans la phase exponentielle

Attention de ne pas tout confondre. La densité optique (DO) mesurée par votre spectro ne doit pas dépasser 0.5-0.6 pour rester dans le domaine de linéarité de votre spectro, pas de votre croissance bactérienne. Le domaine de linéarité dépend de chaque appareil : le spectro que j'utilise dans mon labo peut être utilisé jusqu'à 0.8-0.9 sans trop de problème.

Cordialement

[inviteef7aef59]

merci pour cette précision, avez-vous des sites vers lesquels me guider pour que je m'informe mieux, ma référente de stage, ne m'explique pas grand chose je suis perdue....
Mes bactéries sont transformées pour exprimer une certaine protéine, du coup on doit la cultiver avec de l'IPTG pour induire l'expression, je viens de finir mon bac, je n'ai pas encore beaucoup de connaissances, du coup les dilutions je ne vois pas vraiment à quoi cela sert réellement...

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

Bonjour,



Attention de ne pas tout confondre. La densité optique (DO) mesurée par votre spectro ne doit pas dépasser 0.5-0.6 pour rester dans le domaine de linéarité de votre spectro, pas de votre croissance bactérienne. Le domaine de linéarité dépend de chaque appareil : le spectro que j'utilise dans mon labo peut être utilisé jusqu'à 0.8-0.9 sans trop de problème.

Cordialement

Hello

ça me surprend, on fait souvent des mesures DO>2 sans trop de problème. Les spectrophotomètres eppendorf par exemple mesurent jusqu'a 3

merci pour cette précision, avez-vous des sites vers lesquels me guider pour que je m'informe mieux, ma référente de stage, ne m'explique pas grand chose je suis perdue....
Mes bactéries sont transformées pour exprimer une certaine protéine, du coup on doit la cultiver avec de l'IPTG pour induire l'expression, je viens de finir mon bac, je n'ai pas encore beaucoup de connaissances, du coup les dilutions je ne vois pas vraiment à quoi cela sert réellement...

C'est pas clair. Si vous voulez suivre la croissance, effectivement au de la d'une certaine DO, on dilue pour rendre la mesure plus fiable (cf réponse de FARfadet00).
D'un autre coté, pour certaines expériences, on doit avoir des bactéries à une certaine DO pour éviter d'avoir une population stagnante.
Dans votre cas, sans savoir ce que vous faites avec vos DO et vos bactéries, c''est pas évident...

[inviteef7aef59]

Je comprends que ce ne soit pas clair, cela ne l'est pas pour moi non plus. Je pense que on veut éviter une population stagnante, car si j'ai compris le but de la culture c'est de pouvoir obtenir une induction avec l'ajout de l'IPTG lorsque la DO est autour de 0.5, après on incube avec l'IPTG et on regarde par électrophorèse, s'il y a eu induction...

[Flyingbike]

Alors dans votre cas c'est probablement pour induire au meilleur moment, lorsque les bactéries sont en phase exponentielle, pour avoir un rendement idéal

[FARfadet00]

Bonjour,

ça me surprend, on fait souvent des mesures DO>2 sans trop de problème. Les spectrophotomètres eppendorf par exemple mesurent jusqu'a 3

je n'ai jamais utilisé de spectro eppendorf et je n'y connais pas grand chose en matière de spectrophotomètre (si ce n'est le principe général, bien sûr). Je suppose, qu'en effet, il doit maintenant exister des appareils avec des domaines de linéarité plus étendus ... D'ailleurs, les sondes de densité optique maintenant utilisées sur des fermenteurs de labo (~ 2 L) donnent des mesures correctes en continu.

Tant qu'on est sûr d'être dans le domaine de linéarité de la machine qu'on utilise, tout va bien

Cordialement

[invite9878d5e0]

ma référente de stage, ne m'explique pas grand chose je suis perdue) ......... je viens de finir mon bac, je n'ai pas encore beaucoup de connaissances,

N'ayez pas peur de poser des questions à votre référente ou à d'autres collègues, il n'y a pas de questions bêtes et ce serait dommage de passer à côté d'une explication simple et de rester bloquer sur un truc. Vous venez de passer le bac, on n'attends pas de vous à ce que vous sachiez tout ou que vous ayez retenus tous ce qui a été vu en cours. De plus, vous devez vous en rendre compte il y a une différence entre connaitre la théorie et la mettre en pratique. Votre référente fait ça ces manips tous les jours depuis des années certainement alors pour elle c'est de la routine et... dans certain cas ... peut-être qu'elle même ne sait pas pourquoi on doit faire comme ça ! Un stage c'est fait pour apprendre, y'a pas de honte à ne pas savoir et après vous saurez le pourquoi du comment et pourrez vous même adapter plus tard vos protocoles en toutes connaissances de cause. Bonne continuation dans votre stage !