In situ
Bonjour,
Est-ce quelqu’un peut m’aider, je fais de l’insitu hybridations (Anti-DIG) sur des lames mais cela ne fonctionne pas, est ce que quelqu’un aurais une protocole pour l’Insitu ou qu’est ce que je dois faire pour avoir une hybridations?
Merci d'avance
étant donné la complexité de ces manips, je pense qu'avec aussi peu de détail on ne peut strictement rien faire pour vous aider !
La vie trouve toujours un chemin
En fait je travaille avec des sondes anti DIG (non radioactive), sur des lames de la rétine normalement le gène que je cherche est exprimé (Résultats montrer avec RT-PCR) mais j’ai de la coloration non spécifique et je sais pas c’est quoi le problème j’ai aussi changé la concentration de mes sondes mais ca donne toujours la même chose. Je fais mon hybridations à 65 C O/N puis des lavages à 65C 2 fois, et des lavages au conditions RT 3 fois, je mets la solution de blocking reagments pendants 1 hrs, puis j’ajoute l’anticorps O/N ensuite les lavages et l’anticorps secondaire,
Merci encore
ca marche avec d'autres sondes ?
vous avez du non spé uniquement ? ou aussi du signal ?
Je ne suis pas expérimenté en fish, mais un lavage à température d'hybridation ne risque pas de laver la sonde ??
La vie trouve toujours un chemin
J’ai seulement du non spécifique et des petites points qui sont partout de façons aléatoire, j’en ai fait aussi avec l’anticorps anti-DIG alkaline phosphatase et j’avais encore le non spécifique. Je n’ai pas encore essayer de faire avec une nouvelle sonde merci pour votre aide je vais aussi changer la température de mes lavages, mais est-ce que vous pensez que je dois refaire aussi les solutions pour l’hybridation et le lavage?
Merci encore
