Solution tampon électrophorèse

[invitec13baa4a]

Bonjour à tous, j'ai des recherches à faire sur l'électrophorèse et je lis partout que l'on a besoin d'une solution tampon mais je ne comprends pas son utilité. Merci de votre aide.
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[dalmia]

Hello,

L'électrophorèse consiste à faire migrer des molécules grâce à un courant électrique qui va traverser le gel (d'agarose ou de polyacrylamide par ex) qui contient tes échantillons. Il te faut forcément quelque chose pour conduire ce courant : il s'agit de la solution tampon, qu'on appelle aussi tampon de migration. Techniquement, quand tu fais une électrophorèse, tu as une cuve dans lequel tu places ton gel, ensuite tu recouvres de tampon (ou l'inverse mais osef), tu déposes tes échantillons dans les puits de ton gel, tu fermes ta cuve et tu allumes ton générateur pour appliquer le courant électrique. En faisant bien attention de le faire aller dans le bon sens pour amener tes molécules vers l'autre extrémité de ton gel et de pas les en faire sortir
Si tu mets pas de tampon, au courant électrique ne va traverser ton gel et faire migrer tes molécules.

C'est ce qu'on voit à 3:27 de cette vidéo :
https://www.youtube.com/watch?v=eAd9e2pi-rI

Est-ce que c'est plus clair ?

Dalmia

[invitec13baa4a]

Merci c'est déjà beaucoup plus clair. Ce que je ne comprends pas c'est cette histoire de pH. Le tampon à un pH fixe mais je ne comprends pas en quoi il permet à l'ADN de migrer. En fait je suis perdu avec le pH de l'ADN qui est acide et je ne comprends pas ce que devient ce pH après avoir mis le tampon.

[Pterygoidien]

En général, la solution tampon va non seulement permettre de maintenir le pH à une valeur donnée mais aussi de stabiliser les charges, de façon à ce que tes molécules soient regroupées sur base de leur poids et de leur charge : si une molécule comme l'ADN chargée négativement était mise dans une solution sans tampon, elle s'accaparerait des protons de ta solution et la migration en se ferait pas aussi bien. Ici, le tampon agit comme réservoir d'acides et de bases faibles et permet le déplacement des ions lorsque la solution est traversée par une ddp.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitec13baa4a]

Merci beaucoup

[invitec13baa4a]

J'ai encore une question ���� Je ne comprends pas quand vous dites que le tampon est un réservoir d'acides et de bases faibles

[Pterygoidien]

Dans ce cas je vous renvoie à la définition d'un tampon en chimie. C'est une solution qui contient un couple acide faible/base faible qui sont conjugués : une espèce comprend sa forme acide et sa forme basique. Les formes acide et base conjuguée sont à l'équilibre, et la forme acide est alors un "réservoir à proton", et la forme basique est également le réservoir inverse (il en accepte) de sorte que si on met une espèce acide, l'équilibre va être déplacé dans le sens de la formation de base (les H+ donnés par 'lespèce acide ajoutée vont aller sur la base du tampon), diminuant la quantité de H3O+ de la solution, et ramenant ainsi le pH proche de la valeur d'équilibre : le raisonnement est inverse pour l'ajout d'une base. Une solution tampon est donc une solution qui contient un réservoir d'acide et de base dont l'équilibre acidobasique est atteint et tend vers une valeur de pH.

[invitec13baa4a]

Merci ! Connaissez-vous le couple pour le tampon tbe qui peut être utilisé lors d'une électrophorèse ?

[invitec13baa4a]

Et quand vous dites que l'ADN s'accapparerait des protons je ne vois pas de quoi puisque elle n'est en contact qu'avec le gel ? Et je ne comprends pas pourquoi le maintien d'un équilibre des charges permet un déplacement des ions