Bonjour,
Je souhaite purifier des corps d'inclusion, mais après traitement avec une solution d'urée et de B mercaptoéthanol + centrifugation, mon mélange est encore très visqueux...
Que faire? Sonication? Augmenter le tampon de lyse?
Merci pour votre aide
Delphine
Tu peux aussi ajouter des détergents style NP40 ou triton, augmenter le volume du tampon de lyse dépend de ton besoin final et si tu peux purifier ou concentrer derrière.
La sonication c'est bien, mais si tu as une French Press c'est mieux ^^
Après niveau centri je te conseil de la faire en 2 temps, une première pour enlever le plus gros et une deuxième beaucoup plus forte style 40 000 G / 30 min
le NP40 n'existe plus
C'est de l'ADN qui rend visqueux ?
Sonication ou passage à la seringue+ aiguille ça marche bien (commencer à 23 ou même 18 si c'est très visqueux, puis 25, peut être pas besoin d'aller au delà)
La vie trouve toujours un chemin
Oui et non.le NP40 n'existe plus
Les bouteilles du produit "original" vont traîner pendant encore longtemps dans les labos, je croise encore des stocks de "Natrium"
Octylphenoxy poly(ethyleneoxy)ethanol N° CAS 9002-93-1 (alias =IGEPAL® CA-630) et le 4-Nonylphenyl-polyethylene glycol N° CAS 9016-45-9 (alias = Nonidet™ P 40 Substitute)
Ces deux là sont vulgairement appelé NP-40, il y a de gros abus de langage sur ce nom depuis le début.
Pour l'ADN j'avais zappé le conseil d'utiliser une DNase style Benzonase, car ce n'est pas pas vraiment compatible avec l'Urée, mais il peut faire sa lyse en 2 temps (1 er temps Lysosyme + DNase ; centri et reprise du culot en urée 8M + détergeant)
