Bonjour à tous.
J'aurais une question qui est la suivante :
Par quel procédés peut on isoler un gène (dont on connait la séquence) de cellules d'un organisme spécifique ?
Par exemple si je veux isoler le gène responsable de la traduction de l'ovalbumine chez la poule. Avec quel matériel et quel protocole je peux isoler avant d'amplifier par PCR la séquence voulue ?
Merci d'avance pour vos réponses!
Pas besoin de l’isoler
La pcr si elle est bien pensée sera spécifique de votre cible
La vie trouve toujours un chemin
Bonjour Flyingbike et merci pour cette réponse !
J'aurais une autre question du-coup.
Comment faire pour fixer l'amorce à l'endroit voulu pour que l'ARN polymérase ne réplique que le brin désiré ?
PS : Je ne suis qu'en première année de biologie je ne connais pas toute les subtilités de la PCR.
l'amorce se fixe comme une grande par complémentarité. Si elle est bien choisie, c'est à dire suffisamment spécifique et assez longue, elle n'aura pas le choix et se fixera sur votre cible.
Ensuite, j'imagine que vous voulez parler d'ADN pol plutot que d'ARN pol.
La vie trouve toujours un chemin
Merci pour ces indications !
Mais ducoup avec quel matériel et quel méthode peut-on "customiser" l'amorce ?
Oui excusez moi je voulais bien parler d'ADN polymérase !
Dernière modification par Seiter2468 ; 14/03/2019 à 10h55.
Le design des amorces (par paire, en PCR,) se fait maintenant informatiquement.
Elles doivent répondre a des caractéristiques optimales comme
-longueur (18-24 nucléotides)
-Tm (température à laquelle elles se dissocient de l'ADN cible)
-%GC
-spécificité
....
Ensuite, selon l'application (selon ce qu'on veut faire avec la PCR), il y a de nombreux paramètres variables
La vie trouve toujours un chemin
Merci pour cette indication !
Je me suis un peu renseigné et j'ai vu que pour 5-10 euro on peut se procurer une amorce livraison comprise.
Admettons que je veuille multiplier un gène venant d'un échantillons de cellule eucaryote.
Après avoir libéré le matériel génétique en lysant à l'ultrason la cellule, puis après avoir débarrassé le milieu des lipides et protéines. Comment concrètement les techniciens font ?
Ils chauffent le milieu afin de séparer les doubles brins avant d'introduire les amorces puis les ADN polymérases ?
Il y a d'autres étapes ou c'est à peu prêt tout ?
... dans un chaudron à confiture. Et sur le feu de bois c'est meilleur.Envoyé par Seiter2468
Blague à part ce n'est pas une chose qu'on fait dans sa cuisine, même si les amorces ne coûtent pas cher (d'ailleurs je ne suis pas sûr que tu puisses en acheter auprès des fournisseurs qu'on connaît). Il faut entre autres une machine appelée thermocycleur.
Hahaha oui mon rêve d’adolescent qui se brise... dans un chaudron à confiture. Et sur le feu de bois c'est meilleur.
Blague à part ce n'est pas une chose qu'on fait dans sa cuisine, même si les amorces ne coûtent pas cher (d'ailleurs je ne suis pas sûr que tu puisses en acheter auprès des fournisseurs qu'on connaît). Il faut entre autres une machine appelée thermocycleur.. C'est vrais que le matériel que je vois sur le marché est assez cher pour un particulier (investir plus de 1000 euro pour une centrifugeuse ou un thermocycleur ça fait cher le loisir) quand ils ne sont pas tous simplement introuvables.
