Bonsoir,
Nous avons fait en tp un titrage de la tyrosine par spectrophotométrie, avec différentes solutions de pH. La tyrosine peut se déprotoner en fonction du pH et devenir tyrosinate.
Nous avons alors obtenu plusieurs spectres d’absorptions avec un point isobestique.
On nous demande de choisir une longueur d’onde afin de tracer la courbe Absorbance (x nm)=f(pH) pour déterminer le pKa (auquel on travaillera pour la suite) et le coefficient d’extinction molaire de la tyrosinate.
Avec la loi de Beer-Lambert on a ε=A/l.C ; cependant je ne sais pas à quelle longueur d’onde et à quel pH me placer pour obtenir l’absorbance.
On nous a dit que l’on était sensé trouver un ε 2 fois plus grand que celui de la tyrosine ( qui est d’environ 1200 – 1300), je ne sais également pas pourquoi.
Ce titrage de la tyrosine nous permet ensuite de déterminer combien il y a de tyrosine dans une protéine : la RNAse.
Pour ce faire, nous avons utilisé une chaotrope (à différente concentration) pour dénaturer la protéine afin qu’elle soit dépliée. On obtient également les spectres d’absorption avec plusieurs points isobestiques (à pH=10,5 (=pKa)). On demande de tracer la courbe à une longueur x que l’on choisit absorbance (x nm)=f(concentration en chaotrope), puis de calculer le nombre de tyrosines accessibles lorsque la RNase A est à l’état natif ou dénaturé.
Je ne vois pas non plus comment procéder pour déterminer le nombre de tyrosine, ainsi que celles exposées au solvant.
Si quelqu’un pouvait m’éclairer à ce sujet, je lui serais très reconnaissante.
En vous remerciant d’avance.
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