Carte de restriction a 3 enzymes

[lakinzou]

Bonjour ,
Hier soir j'ai passé ma soirée a chercher une technique claire pour réaliser une carte de restriction a partir d'un profil de restriction. Je n'ai vraiment rien trouvé ou les seuls explications trouvées étaient incompréhensibles. Je vous demande donc de l'aide SVP.

Voici l'énoncé :
exo3.jpg



Je sais qu'il y a beaucoup de personnes compétentes ici et c'est d’ailler pour ça que j'aime ce forum d'entraide sur le thème de la science.
Merci d'avance a ceux qui prendront le temps de m'expliquer

PS : voici un exercice dans le même thème que je n'arrive pas a faire non plus , le but étant de réaliser les profils de restrictions cette fois ci . ( peut être que vous allez préférer m'expliquer a partir de celui la pour réussir a faire le premier exo ? )
exo2.jpg
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[YB17]

Hello !

Je ne suis pas sûr que faire cet exercice à ta place te soit profitable. Je pense que tu dois savoir le résoudre par toi même. Parce que là, ne nous voilons pas la face, c'est la base de la base. Si tu sais faire des additions et des soustractions c'est gagné !
Je t'explique juste comment trouver ce que tu verras dans la 1ere piste de l'exo 2.
La longueur de ton plasmide non digéré est de 4657pb donc quelle que soient tes digestions la somme des longueurs des fragments que tu trouveras seras égale à ce chiffre (attention tout de même pour les cas où des fragments auraient la même taille et ne pourraient pas être différenciés sur le gel).
Tu digères avec EcoR1 donc ton ez va couper 2 fois, une fois au nucléotide "1" et une deuxième fois au nucléotide 572 donc tu obtiens un fragment qui va migrer à 572pb. Le reste de ton plasmide amputé de ces 572pb migrera à 4085pb (4657-572). C'est pas plus compliqué que ça

[dalmia]

Bonsoir,

Pour commencer, j'aime toujours dire que ce genre d'exercice n'a finalement pas grand chose à voir avec de la biologie. C'est de la logique pure et simple à partir du moment où on sait qu'un plasmide est comme un élastique et une enzyme de restriction un coup de ciseau (ou plusieurs !) à un endroit précis
On coupe une fois : on a un bout
On coupe deux fois : on a deux bouts, etc.
A mes yeux il n'y a pas de recette magique pour la logique. Au pire, tu prends un vrai élastique et une vraie paire de ciseaux si tu ne percutes pas avec des dessins sur des feuilles. On observe, on déduit, on fait des essais et ya forcément une combinaison qui finit par fonctionner, comme au Mastermind

A. Quelle taille fait le plasmide ? Info archi simple que tu aurais pu préciser dans ton post pour montrer que tu t'es plongé un minimum dans cet exercice. Tu parles d'une soirée complète mais tu dois être capable de trouver ça en moins d'une seconde.
=> faire une ligne horizontale de cette taille.

B. Que déduis-tu des pistes 5 et 6 ? Chaque piste correspond à une seule enzyme, pareil tu peux trouver le nombre de site de restriction pour chacune du tac au tac.
=> écrire le nombre de site pour Bam, pareil pour Hind

C. tiens tiens, piste 2, j'ai deux enzymes qui ont donné naissance à 3 bouts, bizarre non ? ça m'indique quoi ? par rapport à la piste 7, deux enzymes également mais seulement 2 bouts ?

D. Piste 2, j'ai un bout de 3,4 et un autre d'1,5. Piste 4 : oh, un bout qui fait 4,9. Coïncidence ? Peut-être pas Il faut le voir comme un puzzle.

J'attends tes réponses

Dalmia

[lakinzou]

Bonsoir ,
J'ai fait tout ca au brouillon et comme je n'ai rien obtenu et que je voulais que vous me donniez votre propre methosde je n'ai pas parlé de mes recherches personnelles. La correction je l'ai je cherche juste a comprendre la technique d'obtention des resultats ... Je me lance tout de suite dans dautres essais pour y arriver et je vous tiens au courant ! Merci de votre aide

[A voir en vidéo sur Futura]

[lakinzou]

Voici ce que j'ai obtenu :



J'ai deux possibilités , sont elles bonnes toutes les deux ? je pense que oui mais je ne suis pas sure ...

Merci a tous pour votre aide

[dalmia]

Hello,

Oui elles sont bonnes toutes les deux car c'est en fait deux fois la même proposition, l'une étant l'image miroir de l'autre

Fais attention à tes annotations : la première chose que j'ai regardée est la taille totale du plasmide. Je vois 6 kb sur le gel et 6,1 kb sur tes dessins... si je mets dans la peau d'un prof intraitable, je m'arrête là. Pourquoi être à 0,1 kb près alors que tu peux tout bien caler pour que ça tombe nickel ?

Dalmia