Bonjour
1 ) Les enzymes de restriction permettent d'obtenir soit des extrémités franches, 5' sortantes ou 3' sortantes.
Dans un exo, après avoir classé les différents types d'enzymes , nous devons indiquer les enzymes dont les extrémités sont compatibles entre elles.
On a vu que SMAI CCC-GGG et PVUII CTG-CAG étaient compatibles entre elles . ( ce sont des enzymes permettant d'obtenir des enzymes à extrémités franches , "-' indique la coupure )
Mais je ne comprends pas pourquoi ... Est-ce que toutes les enzymes à extrémités franches sont compatibles entre elles ?
les extrémités des enzymes 5' sortantes sont compatibles uniquement avec des extrémités 5' sortantes ?
les extrémités des enzymes 3' sortantes sont compatibles uniquement avec des extrémités 3' sortantes ?
je prends par exemple deux enzymes 5' sortantes : Pour savoir si leurs extrémités sont compatibles , je regarde si les enzymes coupent au même endroit et s'il y a des nucléotides en commun
Cla I :AT-CGAT et SFU I : TT-CGAA
ici, lenzyme CLA I coupe après 2nucléotides et SFU coupe après deux nucléotides également .
Il ya CG en commun .
= Elles sont compatibles .
2 molécules d' ADN peuvent se ré assembler si leurs bases sont complémentaires( grâce à l'ADN ligase )
[U]autre exemple : SPE I :A-CTAGT et NHE I :G-CTAG C
Je remarque tout de suite que les enzymes de restriction SPE I et NHE I coupent le brin d'ADN après 1 nucléotide . Et, on a 4 nucléotides en commun
: je peux affirmer que ces deux enzymes de restriction permettent d'obtenir des extrémités dont les bases sont compatibles .
ADN 1 ( coupé par SPEI) et ADN 2 ( coupé par NHE) vont s'associer pour former :
5' ACTAGC 3'
3' TGATCG 5'
Bon je pense avoir compris mais je sais pas si c'est très clair dans ma tête ...
2 ) l' ADN du plasmide est circulaire ( PBR 322) et comprend 4363pb.Il est soumis à l'action d'endonucléases de restriction ( ECORI, SMA I , CLA I , BAMHI ...)dans des conditions oùl'hydrolyse est totale.Les produits de digestion enzymatiques sont soumis à une électrophorèse sur gel d'agarose.
Le profil de digestion par ces enzymes aurait-il été le même si la molécule de PBR 322 avait été linéaire ?
Quand l' ADN est linéaire, il y a une relation linéaire entre la vitesse de migration et la taille des fragments d' ADN .
exemple : CLA I : AT-CGAT et PST I : CTGCA-G
les + petits fragments migrent + loin que les gros fragments . Cela signfie que CTGCA migrera moins loin que AT ou CGAT ?
je n'ai pas trop compris la fréquence des sites de restriction ... une enzyme est susceptible de couper tous les 4kPB ?
3) vous disposez de fragments d' ADN qui ont été produits par l'action de différentes enzymes de restriction.Vous souhaitez les insérer dans le vecteur PZT dont le site multiple de clonage est donné ci dessous :
---SMAI--------ECORI-----------PVUII----------BMTL----------SPel
1. Quels sites de restriction du site multiple de clonage utiliserez-vous si vous fragments d'ADN ont des extrémités :
- franches
- ECORI
- NHEL
- NHEL et ECORI ?
Comment procédez-vous ?
je ne comprends pas trop là![]()
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